人胚胎干细胞和小鼠胚胎干细胞定向诱导分化为心肌细胞的对比研究

来源 :第八届北京五洲国际心血管病会议 | 被引量 : 0次 | 上传用户:vergillove
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  目的 对比研究人胚胎干细胞(hESC)和小鼠胚胎干细胞体(mESC)外定向诱导分化为心肌细胞的方法、效率以及抗缺氧凋亡刺激的能力,为体外胚胎干细胞诱导分化为心肌细胞提供基础实验依据.方法 hESC分别通过不加诱导剂的悬浮法和加诱导剂的直接贴壁法诱导分化为心肌细胞;mESC分别通过加和不加诱导剂的悬滴法诱导分化为心肌细胞.免疫荧光染色检测心肌细胞特异标志物cTnT;显微镜下计数比较4组诱导分化细胞出现跳动心肌细胞的时间、百分数和跳动频率;跳动心肌细胞经24h缺氧刺激后,用凋亡试剂盒检测心肌细胞凋亡比例.结果 hESC不加诱导剂组分化出现自发跳动心肌细胞的平均时间在(13.9±0.9)天,百分比为20.8%,平均跳动频率为(63.8±5.6)次/分;hESC加诱导剂组分化出现自发跳动心肌细胞的平均时间在(13.0±1.1)天,百分比为66.7%,平均跳动频率为(63.0±7.0)次/分;mESC不加诱导剂组分化出现自发跳动心肌细胞的平均时间在(14.3±1.0)天,百分比为12.5%,平均跳动频率为(80.2±3.9)次/分;mESC加诱导剂组分化出现自发跳动心肌细胞的平均时间在(12.2±1.2)天,百分比为81.25%,平均跳动频率为(79.9±7.7)次/分.各组跳动心肌细胞cTnT染色阳性;各组跳动心肌细胞缺氧24h后检测到不同的凋亡比例.结论 4种方法均能成功诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞,其中hESC加诱导剂的直接贴壁法诱导成功在国内尚属首次.两种细胞系加诱导剂均比不加诱导剂分化效率明显提高;mESC与hESC相比诱导成心肌细胞更简单快速,效率更高;在无其他保护因子存在的情况下,hESC诱导的心肌细胞抗缺氧凋亡刺激能力比mESC诱导的心肌细胞抗缺氧凋亡刺激能力强,体外维持跳动的时间也更长.
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