棉铃虫MAPK p38基因的克隆及功能分析

来源 :中国植物保护学会第十一次全国会员代表大会暨2013年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangchuabnao
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  昆虫取食Bt毒素后会激活体内的一系列信号途径,Mitogen-activated protein kinase p38 pathway (MAPK p38)是其中的一个重要组成部分,在昆虫对毒素的免疫防御反应中发挥着重要的作用.MAPK p38在昆虫体内的作用包括激活相应的防御反应,增强新陈代谢能力,提高对相关组织的修复能力等,其作用的发挥主要有两个途径.其一,取食Bt毒素后,昆虫会迅速提高MAPK p38基因的表达水平.其二,取食Bt毒素后,昆虫会提高MAPK p38蛋白的磷酸化水平,增强信号转导能力.我们以棉铃虫为实验材料,提取RNA,反转录,设计兼并引物扩增得到了棉铃虫MAPK p38片段,进一步通过5RACE和3RACE实验得到了MAPK p38全长,命名为HaMAPK p38(Gen-Bank accession no.KC895497).该基因与其他昆虫中的相关基因具有极高的相似性,表明其在进化过程中具有极大的保守性.组织表达水平检测表明,该基因主要在中肠中表达.不同龄期的表达水平检测表明该基因主要在幼虫期表达.我们通过dsRNA饲喂的方法在敏感棉铃虫体内下调该基因表达至50%以下,生测表明,下调表达HaMAPK p38降低棉铃虫对Bt的抗性.我们进一步分析抗性棉铃虫和敏感棉铃虫中该基因的表达水平,发现表达水平无显著差异,但是,抗感棉铃虫中HaMAPK p38基因存在较多的点突变位点.该点突变位点是否导致磷酸化水平增强,进而在棉铃虫对Bt毒素的抗性反应中做出贡献需要进一步的证实.
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