论文部分内容阅读
目的:研究MC-LR对生殖系统的毒性作用。材料和方法:体内实验用MC-LR单独或MC-LR/Resveratrol、MC-LR/NAC腹腔注射SD雄性大鼠,检测MC-LR对大鼠睾丸组织凋亡相关蛋白表达的影响,检测线粒体膜电位、氧化应激指标等;用MC-LR单独腹腔注射C57BL/6雌性小鼠,检测氧化应激指标、超微结构及相关蛋白改变。体外实验永久MC-LR单独作用于或MC-LR/Resveratrol、MC-LR/NAC共同作用于原代共培养的生殖细胞,检测凋亡率的影响、细胞中相关因子在蛋白和mRNA水平的变化等;用MC-LR单独作用于小鼠卵巢颗粒细胞后,检测氧化应激指标及相关蛋白变化水平,检测细胞周期、自噬小体、Ca2+及相关蛋白表达。结果:MC-LR的雄性生殖系统毒性表现在体内和体外均能引起大鼠睾丸组织和原代培养的睾丸支持-生精共培养细胞凋亡率增加,睾丸组织和原代细胞中与凋亡相关蛋白表达显著增加、线粒体膜电位降低,在经Resveratrol、NAC及Caspase抑制剂预处理后,凋亡率及凋亡相关蛋白表达显著降低。MC-LR的雌性生殖系统毒性表现在在体内和体外均能引起小鼠卵巢组织和小鼠卵巢颗粒细胞发生氧化应激,小鼠卵巢组织病理损伤程度加重,超微结构显示MC-LR诱导卵巢生殖细胞内质网、线粒体肿胀,并出现自噬溶酶体,与内质网应激和自噬相关蛋白表达显著增加。当内质网应激抑制剂能够抑制MC-LR诱导的CHO细胞自噬水平,而自噬抑制剂能加重CHO细胞的内质网应激水平。结论:①MC-LR可以诱导生殖系统氧化应激,而NAC具有明显的改善作用;②MC-LR可以通过线粒体途径引起生殖细胞凋亡,而Resveratrol可以通过激活细胞中SIRT1的表达,改善MC-LR对生殖系统的毒性作用,同时NAC可以抵抗MC-LR诱导的生殖细胞凋亡;③MC-LR可以引起小鼠卵巢颗粒细胞和CHO细胞发生自噬,内质网应激-自噬途径在MC-LR诱导CHO细胞凋亡过程起着重要作用。