【摘 要】
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采用RT-PCR技术扩增禽呼肠孤病毒ARV S1133株与广西分离株R2 σ NS非结构蛋白基因,将σ NS基因克隆到质粒表达载体PGEX-4T-1获得重组质粒,经PCR、酶切鉴定以及测序后进行序列
【机 构】
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广西大学动物科技学院,南宁,530005
【出 处】
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第八届优质鸡的改良生产暨发展研讨会
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采用RT-PCR技术扩增禽呼肠孤病毒ARV S1133株与广西分离株R2 σ NS非结构蛋白基因,将σ NS基因克隆到质粒表达载体PGEX-4T-1获得重组质粒,经PCR、酶切鉴定以及测序后进行序列分析,σ NS基因插入的位置,大小和阅码框架均正确,将阳性克隆命名为PGEX-S1133-σ NS和PGEX-R2-σNS.构建好的重组质粒,37℃ 1 mmol/LIPTG诱导,SDS-PAGE分析超声裂解后的上清和沉淀.结果显示,目的蛋白以包涵体方式表达,蛋白分子量约为66.2ku,约占菌体总量的31.5％-34.8％.Western-blotting分析表明,目的蛋白能够与ARV阳性血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有较好的抗原性.
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