【摘 要】
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旨在克隆肉鸡硫氧还蛋白(Trx)基因，建立肉鸡硫氧还蛋白的原核表达体系，纯化具有生物活性的重组肉鸡硫氧还蛋白.根据GenBank中Trx的cDNA序列及原核表达载体pET28a(+)中的多克隆位点设计引物，进行Trx的克隆和原核表达载体的构建；将重组载体在大肠杆菌中表达；应用镍柱亲和层析的方法对该融合蛋白进行纯化；采用胰岛素还原法对重组肉鸡硫氧还蛋白进行活性鉴定.结果显示成功构建了pET28a-T
【机 构】
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华南农业大学兽医学院,广州510642 中国科学院华南植物园,广州510642
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜内科学会2014年学术研讨会
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旨在克隆肉鸡硫氧还蛋白(Trx)基因，建立肉鸡硫氧还蛋白的原核表达体系，纯化具有生物活性的重组肉鸡硫氧还蛋白.根据GenBank中Trx的cDNA序列及原核表达载体pET28a(+)中的多克隆位点设计引物，进行Trx的克隆和原核表达载体的构建；将重组载体在大肠杆菌中表达；应用镍柱亲和层析的方法对该融合蛋白进行纯化；采用胰岛素还原法对重组肉鸡硫氧还蛋白进行活性鉴定.结果显示成功构建了pET28a-Trx重组质粒，该重组蛋白的最适诱导条件是37℃下用0.4 mmol/L IPTG诱导4 h.纯化的目的蛋白纯度可达到90％，浓度为4 mg/ml.纯化的重组肉鸡硫氧还蛋白(GgTrx)具有较高的还原胰岛素二硫键的能力，并且呈现出浓度效应.结果提示已成功在大肠杆菌中表达了重组肉鸡硫氧还蛋白，纯化的目的蛋白纯度高，具有还原二硫键的活性，为将该蛋白应用于治疗氧化应激性疾病奠定了基础.
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