【摘 要】
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利用PCR分别扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF3基因和ORF5基因,按正确的读码框用串联的方式依次克隆入pMD18-T载体.经过酶切鉴定和测序证实无误后,酶切目的基因亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV.构建成功的重组穿梭质粒经酶切和测序鉴定,含有完整的目的基因表达盒,穿梭质粒用PmeI线性化后可与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在细菌(BJ5183)内进行同源重组,以产生
【机 构】
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广东省农科院兽医研究所,广州,广东,510640;西北农林科技大学动物科技学院,杨凌,陕西,712100
【出 处】
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中国畜牧兽医学会第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会
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利用PCR分别扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF3基因和ORF5基因,按正确的读码框用串联的方式依次克隆入pMD18-T载体.经过酶切鉴定和测序证实无误后,酶切目的基因亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV.构建成功的重组穿梭质粒经酶切和测序鉴定,含有完整的目的基因表达盒,穿梭质粒用PmeI线性化后可与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在细菌(BJ5183)内进行同源重组,以产生重组腺病毒质粒.将PCR与PacI酶切鉴定的重组腺病毒质粒用PacI线性化后转染293细胞,在293细胞内包装成为完整的腺病毒,通过荧光显微镜观察、PCR可以确定ORF1基因和ORF2基因串连重组腺病毒构建成功。
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