【摘 要】
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目的:研究刀豆蛋白A(ConA)对小鼠胚胎干(ES)细胞及衍生肝组织的毒性作用,为后续建立用于评价肝脏炎症恶性转化的模型提供理论基础.方法:MTT法检测ConA对ES细胞存活率的影响,并确定后续实验的加药时间和浓度;ES细胞衍生肝组织过程采用经典的悬滴培养法,即悬滴培养5天,贴壁培养18天;肝组织分化成熟后(D5+18)开始加入一定浓度的ConA,并检测不同浓度,不同加药时间下细胞培养上清液中AL
【机 构】
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浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所 杭州 310058 浙江大学竺可桢学院巴德年班 杭州 31
【出 处】
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浙江省毒理学会第一届学术年会暨食品药品与人类健康论坛
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目的:研究刀豆蛋白A(ConA)对小鼠胚胎干(ES)细胞及衍生肝组织的毒性作用,为后续建立用于评价肝脏炎症恶性转化的模型提供理论基础.
方法:MTT法检测ConA对ES细胞存活率的影响,并确定后续实验的加药时间和浓度;ES细胞衍生肝组织过程采用经典的悬滴培养法,即悬滴培养5天,贴壁培养18天;肝组织分化成熟后(D5+18)开始加入一定浓度的ConA,并检测不同浓度,不同加药时间下细胞培养上清液中ALT,AST的含量,考察衍生肝组织肝细胞的损伤情况.
结果:随着加药浓度的加大和时间的延长,ConA对ES细胞的毒性作用存在显著的时效和量效关系;其IC50的值分别为:12h,240.1mg/ml;24h,48.42mg/ml;36h,28.94mg/ml;48 h,30.04mg/ml;72h,29.99mg/ml。选择了1mg/m3.125mg/ml,12.5mg/ml继续后续实验。ES细胞分化培养至D5+18,可见大片成熟的肝细胞(ALB+)及血管内皮细胞(PECAM-1+)镶嵌成血窦,形成ES细胞衍生肝组织;向分化成熟的肝组织中分别加入1mg/m,3.125mg/m1,12.5mg/ml的ConA lh,2h,6h,8h,12h,24h后,可见细胞培养上清液中ALT,AST的含量呈上升趋势,并在8h达到峰值,提示此时肝细胞的损伤作用可能最大,后续考察其他指标时应尽量避开这个时间点。
结论:ConA对ES细胞及ES细胞衍生的肝组织均具有一定的毒性作用,且呈现显著的时效与量效关系。下一步实验预计考察加入ConA后衍生肝组织是否分泌炎症介质IL-6,以判断该分化体系是否可以用于建立评价炎癌转化的模型。
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