【摘 要】
：
草鱼呼肠孤病毒(GrassCarp Reovirus,GCRV)是水生呼肠孤病毒中致病性最强的毒株,其基因组由11条分段的dsRNA片段组成.其中VP5蛋白由S％基因片段编码,VP7蛋白由S10片段编码.VP5与VP7蛋白在介导病毒粒子进入宿主细胞起着重要的作用.本研究从患出血病的草鱼中分离草鱼呼肠孤病毒,命名为GCRY096.参照GenBank上登录的草鱼出血病病毒(Grass carp hem
【机 构】
：
广东海洋大学;广东省水产经济动物病原生物学与流行病学重点实验室, 广东湛江524025
论文部分内容阅读
草鱼呼肠孤病毒(GrassCarp Reovirus,GCRV)是水生呼肠孤病毒中致病性最强的毒株,其基因组由11条分段的dsRNA片段组成.其中VP5蛋白由S％基因片段编码,VP7蛋白由S10片段编码.VP5与VP7蛋白在介导病毒粒子进入宿主细胞起着重要的作用.本研究从患出血病的草鱼中分离草鱼呼肠孤病毒,命名为GCRY096.参照GenBank上登录的草鱼出血病病毒(Grass carp hemorrhagic virus,GCHV)基因序列设计引物,提取病毒总RNA,应用RT-PCR技术扩增GCRV096外衣壳蛋白基因vp5-vp7全长.vp5基因全长1981bp,完整开放阅读框(ORE)为1947bp,编码648个氨基酸,预测分子量约为71.3kDa.vp7基因全长852bp,完整开放阅读框(ORF)为831bp,编码276个氨基酸,预测分子量约为30.4kDa.在克隆vp5与vp7基因全长的基础上,构建了其原核表达载体pET-VP5、pET-VP7,并将其导入大肠杆菌BL21 (DE3)中进行融合蛋白的表达,在优化表达条件下,获得体外表达蛋白, 对表达结果进行分析,为进一步研究草鱼呼肠孤病毒致病机制奠定基础.
其他文献
2009年9月下旬江西省南昌市一龄、二龄草鱼大面积暴发出血病,在排除细菌和寄生虫感染可能性后,取具有典型症状的病鱼组织进行电镜观察,在脾、肾样品中发现大量病毒颗粒,病毒无囊膜,近球形,直径约70nm,形态与已报道的草鱼呼肠孤病毒(Grass Carp Reovirus,GCRV)相似。取病鱼肌肉、内脏研磨,组织液经离心、过滤除菌后进行攻毒实验和细胞感染实验,结果发现攻毒鱼大量死亡且出现典型出血症状
从近海区生态环境样品分离纯化的98株微生物中,用根癌农杆菌平板筛选模型经过初筛和复筛,筛选出具有细菌群体感应干扰活性的微生物细菌ZD 27,并对其进行形态、生理生化特性和16S rDNA分子鉴定,在此基础上考察其水解酶活特性和热稳定性。结果显示,该菌株具蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)的典型特征,其16S rDNA序列通过比对分析,与GenBank中蜡样芽孢杆菌的16S rDNA的部
一株从锯缘青蟹中分离的呼肠孤病毒(Scylla serrata reovirus,简写为SsRV),基因组为13个节段的双链RNA.通过电子显微镜观察结果表明：完整的病毒粒子直径为70nm,与呼肠孤科其他已知病毒粒子大小一致.由于经过蔗糖密度梯度纯化,病毒粒子失去外层衣壳,直径约为55nm(比其他呼肠孤科的完整病毒粒子略小).病毒粒子形态和基因序列分析证明SsRV属于呼肠孤病毒科.SsRV RNA
呼肠孤病毒(GrassCarp Reovirus,GCRV)是草鱼出血病的病原体,其基因组由11条分段的dsRNA片段组成.其中VP6蛋白由S8基因片段编码,NS38蛋白是由S9片段编码.VP6蛋白在病毒的转录与复制及病毒核衣壳的形成中起重要作用,且有弱的dsRNA结合能力,且其中和效价强.本研究提取了GCRV 096病毒的基因组RNA,通过RT-PCR扩增vp6和NS38两个基因,获得了其全基因
造血组织在甲壳类动物的免疫防御中起着非常重要的作用,而Astakine是一种具有促进造血组织细胞分化和增殖的细胞因子.研究证实WSSV选择BP53 (ATP合酶β亚基)作为侵染宿主的靶点,在淡水螯虾中发现BP53作为Astakine的受体参与了细胞分化.因此WSSV、BP53、Astakine之间存在着一定的联系.本实验主要针对WSSV、BP53、astakine三者之间进行研究.应用反转录聚合酶
根据迟缓爱德华氏菌165 rRNA保守区域基因序列,设计引物和TaqMan荧光探针,通过对反应条件进行优化,建立了用于检测迟缓爱德华氏菌的荧光定量聚合酶链式反应(Fluorescent quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)诊断方法.通过所构建的16S rRNA质粒标准品核酸拷贝数(C/5,x)的对数值与其对应Ct值(y)的相关性,分析得到FQ
新鲜度是鱼类或鱼类制品质量的一个重要指标，对产品最终质量十分重要.鱼类新鲜度的传统检测方法主要有菌落总数、挥发性盐基态氮(TVB-N)、硫代巴比妥酸(TBA)、鲜度指标(K值)等，但这些检测方法测定耗时长、操作较复杂需要高技术的操作人员，不能满足快速检测的要求.为了满足快速检测淡水鱼新鲜度的要求，本文提出一种快速检测淡水鱼新鲜度的方法—一电导法，实验以草鱼为样品，研究-3℃、3℃贮藏过程中鱼肉浸出
江西省是我国草鱼养殖主产区之一,每年5月份至10月份一龄及二龄草鱼种因暴发出血病而给渔民带来了巨大损失.为了最终实现对该病进行防控的目的,对病原的鉴定及检测方法的建立是最基础也是最重要的环节.本人手2009年9月下旬在江西省南昌市收集一龄、二龄具典型出血症状的草鱼种样品,取肌肉、内脏研磨,组织液经离心、过滤除菌后进行攻毒实验和细胞感染实验.结果发现实验鱼大量死亡且出现典型出血症状,取病变组织电镜观
从本实验室分离保存的3种水产动物病原菌鳗弧菌(V.anguillarum)MN、鳗弧菌(V.anguillarum) 3101、费氏弧菌(V.fischeri)及对虾肠道中分离的1种非病原菌坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)培养液中分别获取了分泌性蛋白,进行SDS-PAGE,并将表达量高的蛋白进行MALDI-TOF/TOF质谱鉴定.结果显示,有6条主要蛋白带被鉴定出来,分别是鳗弧菌金属
研究渔药氧氟沙星(OFLX)对CYP3A酶活性,CYP3A和PXR基因转录水平的变化,确定OFLX-PXR-CYP3A关系.利用分光光度计法研究了草鱼肾细胞系(CIK)中CYP3A指示酶类红霉素-N-脱甲基酶(ERND)活性并建立CYP3A酶活性体外检测方法；在获取CYP3A和PXR基因cDNA序列基础上,利用实时荧光定量PCR技术研究了CYP3A和PXR基因转录水平并建立检测基因表达量方法；通过