番茄几丁质酶基因转化西瓜研究初报

来源 :2004年全国蔬菜分子育种研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nmhnhjcf
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本试验构建了以CaMV35s启动子驱动的含有番茄酸式胞外几丁质酶基因(CHI3)的植物表达栽体,通过冻融法导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株EHA105中,用叶盘法转化西瓜(Citrullus lanatus (Thunb.)Mansfeld var.citroides)栽培种"中育1号",通过卡那素抗性鉴定、CHI3基因的PCR检测、Southern斑点杂交、RT-PCR检测证实CHI3基因已经整合到西瓜基因组中,并获得表达.
其他文献
采用正交试验设计的方法,建立了西瓜RAPD分析的优化反应体系,在此基础上,对西瓜核雄性不育G17AB系进行了RAPD分析,筛选到了一个与西瓜育性基因连锁的RAPD标记A12,与育性基因之间遗传距离为8.1cM.
通过真空渗入法获得了转抗虫基因pinⅡ的不结球白菜.各独立转化株系在温室经自交后,对自交一代(T2代)进行了小菜蛾连续饲喂实验,并利用标记基因bar介导的除草剂Basta抗性进行了自交一代(T2)及二代(T3)中外源基因的遗传分离情况分析.结果表明获得的转pinⅡ基因白菜一些株系具有明显的抗虫效果,主要表现在影响小菜蛾的虫体发育,降低虫体体重,提高死亡率和降低虫体的化蛹率、羽化率等方面.通过除草剂
对108份我国茄子主要地方品种和35份主要选育品种进行了基于形态性状和基于PAPD/ISSR标记的遗传多样性分析,结果表明地方品种的遗传多样性(遗传多样性指数总和18.06)高于选育品种(15.83).聚类分析表明,地方品种和选育品种都可以分为4个类群,并在多变量对应分析中得到验证.此外,我们的研究还表明,在茄子种质资源遗传多样性研究中,ISSR标记是一种多态性丰富、简便高效的标记手段.
通过对由具有6个无毒基因不同表现型的马铃薯晚疫病菌构建的4个混合池进行cDNA-AFLP分析、共获得85个与无毒基因相关的差异表达片段,其中与无毒基因Avr1、Avr2、Avr3-Avr10-Avr11、Avr4相关的差异表达片段分别为20,28,16和21个.将这些差异表达片段对20个晚疫病病菌个体进行无毒基因差异表达验证,得到无毒基因连锁群Avr3-Avr10-Avr11的修选片段1个,即A1
以榨菜子叶诱导的愈伤组织为外植体,建立了根癌农杆菌介导芜菁花叶病毒Hc-Pro基因在榨菜上的高效转化体系.通过对影响根癌农杆菌转化的几个因素的研究发现,继代次数、共培养温度以及共培养时间都对转化效率有一定的影响.继代2次,24℃下共培养2天时,转化效率最高,达1.92﹪.再生的部分植株经PCR检测表明,目的基因已经整合到榨菜基因组中,ELISA检测表明,转基因植株对芜菁花叶病毒有较好抗性.
本文采用细胞学和分子标记方法对甜瓜属人工异源四倍体(C.hytivus Chen and Kirkbride,2n=4x=38)的亲本染色体组间的交换重组进行了研究.通过对减数分裂中期I染色体行为观察,在108个花粉母细胞中有50个细胞具有多价体,占46.3﹪,染色体的平均构型为0.56Ⅰ+17.36Ⅱ+0.35Ⅲ+0.26Ⅳ+0.046Ⅴ+0.056Ⅵ,表明两亲本染色体组间发生了广泛的重组交换.
本研究以榨菜无菌苗子叶、茎段为外植体,研究通过不同的再生方法建立的再生体系.结果表明:带叶柄的叶培养在MS+0.5mg/LNAA+3mg/LBA上可直接诱导不定芽的产生,诱导率达100﹪.子叶培养在MS+0.25mg/LNAA+0.5mg/LBA+0.25mg/L2,4-D培养基上,可获得具有高分化能力的愈伤组织,愈伤组织在MS+1mg/LBA+0.2mg/LNAA培养基上的分化频率可达50﹪左右
以萝卜幼小花药与叶片为材料,初步建立了mRNA差异显示技术体系.4种提取总RNA方法中,改进的SDS/酸酚法比CTAB/酸酚法和SDS碱酚法更合适;改进的热硼酸法(HB)提取的RNA质量也较高,但所需时间较长,成本较高.以改进的SDS/酸酚法获得的RNA进行纯化后,其OD/OD在2.0~2.2之间,说明RNA样品蛋白或杂质较小;总RNA进行反转录与差异显示分析表明,高分辨力的cDNA片段在100~
以榨菜细胞质雄性不育系及其保持系基因组总DNA为模板,通过特异引物PCR方法克隆了榨菜atp A基因,基因大小为1524bp,推定编码507个氨基酸,进化分析表明atpA基因非常保守;进一步分析发现了不育系及其保持系atpA基因的5′UTR区存在差异,这为能量代谢相关基因与细胞质雄性不育性产生的关系提供了分子证据.
番茄是世界上最主要的蔬菜作物之一,叶霉病(Cladosporium fulvum Cooke)的发生和蔓延使保护地番茄生产受到严重影响,培育抗叶霉病的番茄品种是控制该病害最经济有效的方法.本研究根据Cf-5的基因序列设计特异扩增引物,以7个含有不同叶霉病抗病基因的品种为试材,扩增Cf-5基因2558~3523bp之间的单拷贝片段,7个材料均获得了966bp的特异扩增片段.用限制性内切酶Tag I对