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成骨细胞分化能力下降导致骨形成减少是引起失重性骨质流失的重要原因之一.然而,失重抑制成骨细胞分化的机制仍不清楚.微管微丝交联因子1(microtubule-actin crosslinking factor 1,MACF1)作为细胞骨架交联蛋白,在调节细胞迁移、协调细胞发育及维持组织完整性中发挥重要作用.我们前期研究发现,模拟失重抑制成骨细胞分化,下调MACF1基因表达,且改变了MACF1与微丝、微管间的共定位关系.因此,本文研究微管微丝交联因子1(microtubule-actin crosslinking factor 1,MACF1)在前成骨细胞迁移及分化中的作用及其可能机制.利用shRNA技术,通过构建慢病毒载体pGLV3/H1/GFP-Puro-shRNA-MACF1,用慢病毒载体转染MC3T3-E1细胞,获得MACF1低表达的稳定前成骨细胞株(LV3-shRNA-MACF1),同时制备阴性对照细胞株(LV3-shRNA-NC).采用MC3T3-E1细胞,LV3-shRNA-NC细胞,以及LV3-shRNA-MACF1细胞,transwell检测MACF1低表达对前成骨细胞迁移能力的影响；用诱导成骨分化培养基分别培养MC3T3-E1细胞、LV3-shRNA-NC细胞以及LV3-shRNA-MACF1细胞,茜素红S染色观察矿化结节形成情况；Real-time PCR检测成骨分化相关分子碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、runt-related transcription factor 2 (Runx2)、Ⅰ型胶原α1(type Ⅰ collagenα1,Col Iα1)和骨钙素(osteocalcin,OC)的基因表达.结果发现,经过18h细胞迁移后,LV3-shRNA-MACF1细胞迁移数目明显少于MC3T3-E1与LV3-shRNA-NC细胞.茜素红S染色显示,经过17d (day)与21 d诱导成骨分化后,与MC3T3-E1与LV3-shRNA-NC细胞形成的矿化结节相比,LV3-shRNA-MACF1细胞形成矿化结节显著减少.Real-time PCR检测结果显示,MACF1低表达明显改变了成骨分化相关基因ALP、Runx2、Col Iα1和OC的表达.结果表明,MACF1的缺失抑制了前成骨细胞的迁移与分化,表明MACF1可促进前成骨细胞迁移与分化.本研究为后期研究MACF1参与模拟失重抑制成骨细胞分化的作用机制奠定基础.