【摘 要】
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FQ-PCR标准曲线法准确定量基因表达的关键在于标准品与待检样本的扩增效率是否一致。为检测DNA标准品与样本cDNA扩增效率的一致性,探讨定量用标准品的最佳制备方法,本文
【机 构】
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Laboratory Animal Center, Dalian Medical University, Dalian 116044, China
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FQ-PCR标准曲线法准确定量基因表达的关键在于标准品与待检样本的扩增效率是否一致。为检测DNA标准品与样本cDNA扩增效率的一致性,探讨定量用标准品的最佳制备方法,本文以FABP5、PPAR-α及β-actin三个基因为对象,分别采用质粒纯化法、PCR产物直接纯化法、PCR产物凝胶回收法制备DNA标准品,10倍梯度稀释后用FQ-PCR制作标准曲线。并以10倍梯度稀释的样本eDNA标准曲线的参数为对照,进行比较分析。结果表明,不同方法制备的DNA标准品的扩增效率差异较大,并且与cDNA的扩增效率不一致,不能对cDNA样本进行准确定量。另外,不同cDNA样本同一基因的扩增效率一致。因此用eDNA作为标准品,虽不能对基因表达水平进行绝对定量,但可进行准确的相对定量。
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