腺病毒介导弹力蛋白原基因重建大鼠腹主动脉瘤模型瘤壁弹力纤维及检测

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目的:用携带有绿色荧光蛋白标志的弹力蛋白原(tropoelastin,TE)基因的腺病毒(AdTE-GFP),转染体外培养的主动脉血管平滑肌细胞(vascular smoothmuscle cells,VSMCs),并检测重组弹力蛋白的表达,转染大鼠腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)模型重建体内弹力纤维。 方法:用猪胰弹力酶灌注构建大鼠AAA模型,将腺病毒直接灌注入瘤腔。体内和体外均用荧光显微镜鉴定腺病毒转染VSMCs是否成功。分别用real-time RT-PCR的方法和Western方法检测转染后各个时间点(体外为转染后1,3,5 d,体内为转染后即刻、2周和4周)TE的mRNA和重组弹力蛋白表达水平,并与空病毒组和空白对照组的结果进行对比。用免疫组化的方法分析体内新生弹力纤维情况。 结果:AdTE-GFP转染抑制了AAA的形成,空白对照组的AAA直径增加(48.50±16.55)%,空病毒组的AAA直径增加(39.84±15.59)%,而AdTE-GFP转染的AAA直径缩小(23.04±14.49)%(P<0.01)。组织学结果表明,AdTE-GFP转染组在瘤壁出现重建的弹力纤维。Real-time PCR鉴定AdTE-GF转染组无论体外还是体内,TEmRNA的表达量明显增加;用Western方法通过检测GFP的表达来反映弹力蛋白表达量,发现无论在体内还是体外表达趋势是减少的。特殊染色和GFP抗体染色证明在转染AdTE-GFP的瘤壁VSMCs后,有新生弹力纤维出现。 结论:AdTE-GFP能有效转染VSMCs,并在体内和体外均有重组弹力蛋白的表达。AAA壁中的重组弹力蛋白和重建的弹力纤维具有抑制和逆转AAA扩张的作用。
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