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目的:用携带有绿色荧光蛋白标志的弹力蛋白原(tropoelastin,TE)基因的腺病毒(AdTE-GFP),转染体外培养的主动脉血管平滑肌细胞(vascular smoothmuscle cells,VSMCs),并检测重组弹力蛋白的表达,转染大鼠腹主动脉瘤(abdominal aortic aneurysm,AAA)模型重建体内弹力纤维。
方法:用猪胰弹力酶灌注构建大鼠AAA模型,将腺病毒直接灌注入瘤腔。体内和体外均用荧光显微镜鉴定腺病毒转染VSMCs是否成功。分别用real-time RT-PCR的方法和Western方法检测转染后各个时间点(体外为转染后1,3,5 d,体内为转染后即刻、2周和4周)TE的mRNA和重组弹力蛋白表达水平,并与空病毒组和空白对照组的结果进行对比。用免疫组化的方法分析体内新生弹力纤维情况。
结果:AdTE-GFP转染抑制了AAA的形成,空白对照组的AAA直径增加(48.50±16.55)%,空病毒组的AAA直径增加(39.84±15.59)%,而AdTE-GFP转染的AAA直径缩小(23.04±14.49)%(P<0.01)。组织学结果表明,AdTE-GFP转染组在瘤壁出现重建的弹力纤维。Real-time PCR鉴定AdTE-GF转染组无论体外还是体内,TEmRNA的表达量明显增加;用Western方法通过检测GFP的表达来反映弹力蛋白表达量,发现无论在体内还是体外表达趋势是减少的。特殊染色和GFP抗体染色证明在转染AdTE-GFP的瘤壁VSMCs后,有新生弹力纤维出现。
结论:AdTE-GFP能有效转染VSMCs,并在体内和体外均有重组弹力蛋白的表达。AAA壁中的重组弹力蛋白和重建的弹力纤维具有抑制和逆转AAA扩张的作用。