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动脉粥样硬化(Atherosclerosis)是慢性炎性疾病,是缺血性心脑血管疾病(如冠心病、心绞痛、心肌梗塞等)共同的病理生理基础,由动脉管壁上胆固醇累积的斑块形成引起.巨噬细胞结合并且吞噬修饰的低密度脂蛋白(modified low-density lipoprotein,mLDL)是泡沫化细胞形成的主要原因.CD36 是B 型清道夫受体(SR-B)一个成员,CD36 是对氧化修饰的低密度脂蛋白(Ox-LDL)有高亲和力的一个主要的受体,能够介导其内吞,使细胞发生泡沫化,这说明CD36 在动脉硬化斑块发展中起重要的作用.因此,寻找能拮抗CD36 蛋白与修饰的低密度脂蛋白(mLDL,modifiedLow-Density-Lipoprotein)结合的目标化合物,将为泡沫细胞形成机制的研究和抗动脉粥样硬化药物先导化合物的发现奠定基础.本课题组前期基于Invitrogen 的Bac-to-Bac？杆状病毒表达系统,在昆虫细胞Sf9 中高表达人CD36 蛋白,通过与荧光配基的结合作用,成功构建了人CD36 拮抗剂筛选模型.应用该模型对化合物库和微生物样品库8000 个化合物进行筛选,获得一个活性化合物IMB801,其IC50 值为2.8 μM,最高抑制活性达83％.利用荧光显微照相技术能明显观察到活性化合物作用后,昆虫细胞表面所结合的荧光标记的乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)的减少.流式细胞实验证明,在小鼠巨噬细胞Raw264.7 和人单核-巨噬细胞THP-1 中,不同浓度的IMB801 作用后,能剂量依赖地抑制细胞对Ac-LDL 的摄取.进一步研究发现,IMB801 能够明显上调小鼠巨噬细胞Raw264.7 中ABCG1、LXRα蛋白的表达,对ABCA1 蛋白调节作用较弱,而对CD36 蛋白的表达水平无明显影响.在脂质代谢的研究中,利用巨噬细胞泡沫化实验,通过油红O 染色,我们发现IMB801 能明显减少泡沫化巨噬细胞Raw264.7 胞内的脂质含量.综上所述,化合物IMB801 能够抑制CD36 蛋白对修饰的低密度脂蛋白的摄取,并且可通过激活LXRα 提高下游靶基因ABCA1/ABCG1 的表达,有效减少细胞内脂质积累,是潜在的具有抗动脉粥样硬化作用的先导化合物.