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目的:研究鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药的表型和分子机制。
方法:采用琼脂纸片扩散法(K-B法)及琼脂稀释法从临床分离的84株泛耐药鲍曼不动杆菌中随机选取8株,采用外排泵抑制试验筛查外排泵表型阳性菌株,乙二胺四乙酸(EDTA)协同试验筛选金属β内酰胺酶表型,改良三维试验检测ESBLs和AmpC酶,PCR扩增耐药菌株的KPC酶、碳青霉烯酶和ESBLs基因,并测序分析。提取外膜蛋白进行二维电泳和质谱鉴定分析。
结果:PABN抑制试验显示亚胺培南MIC值下降均≤原来的1/4,而美罗培南MIC值下降为原来1/4者4例(4/8)。EDTA协同试验结果显示阴性。改良Hodge试验检测8株耐药菌结果阳性。耐药基因PCR扩增和测序证实8株耐药菌中均含有KPC-2酶基因,7株有blaOXA-23基因,5株含blaTEM基因;耐药菌株和敏感菌株差异膜蛋白组学鉴定出CarO、OmpA和推测分子量为41103外排泵膜蛋白。
结论:本次试验中鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药机制主要系产生KPC-2酶、blaOXA-23酶,膜孔蛋白CarO表达缺失所致,外排泵过度表达可能参与美罗培南的耐药。