【摘 要】
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目的 用体外研究方法,通过检测Caspases活性、线粒体膜电位(△Ψm)及细胞凋亡,探讨常见有机溶剂三氯乙烯(TCE)诱导正常人表皮角质形成细胞(NHEK)凋亡过程的可能机制,为TCE药疹样皮炎的防治提供试验依据.方法 用0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 mmol/L的TCE处理NHEK 4h,并培养4、8、12、24 h,收集细胞,分光光度法检测上清中Caspase-9、Caspa
【机 构】
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安徽医科大学公共卫生学院;安徽医科大学皮肤病研究所 安徽医科大学第一附属医院,安徽 合肥 2300
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目的 用体外研究方法,通过检测Caspases活性、线粒体膜电位(△Ψm)及细胞凋亡,探讨常见有机溶剂三氯乙烯(TCE)诱导正常人表皮角质形成细胞(NHEK)凋亡过程的可能机制,为TCE药疹样皮炎的防治提供试验依据.方法 用0.125、0.25、0.5、1.0、2.0 mmol/L的TCE处理NHEK 4h,并培养4、8、12、24 h,收集细胞,分光光度法检测上清中Caspase-9、Caspase-8和Caspase-3活性；Annexin-Ⅴ/PI双染后流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡,Rh123/PI双染后FCM检测线粒体膜电位；Caspase-3抑制剂和Caspase-9抑制剂预处理组,用100μmol/L Z-DEVD-FMK或Z-LEHD-FMK预处理NHEK 1 h,然后用2.0 mmol/L TCE染毒4h后培养至12 h.结果 不同浓度TCE处理NHEK 4h后培养不同时间,可诱导caspase-3和caspase-9活性呈剂量-和时间-效应的升高,培养12和24h,各TCE处理组caspase-3和caspase-9活性与对照相比差异均有统计学意义(p＜0.05),而对caspase-8活性影响不明显.不同浓度TCE处理NHEK 4h后培养12h,Annexin-Ⅴ+ /PI-所占百分比随TCE剂量增加而升高,0.125 mmol/L TCE组外,其余组Annexin-Ⅴ+/PI-细胞所占百分比与对照组相比差异有统计学意义(p＜0.05).Annexin-Ⅴ+/PI-细胞所占百分比与Caspase-3和Caspase-9活性,Caspase-3活性与Caspase-9活性都呈正相关(p＜0.05),与Caspase-8活性不相关.100μmol/L Z-DEVD-FMK预处理明显抑制2.0 mmol/L TCE诱导的caspase-3活性和AnnexinⅤ+/PI-细胞所占百分比的增加(p＜0.05),对caspase-9活性影响不明显.100 μmol/L Z-LEHD-FMK预处理不仅抑制2.0mmol/L TCE诱导的caspase-3活性和Annexin-Ⅴ +/PI-细胞所占百分比的增加,还明显抑制Caspase-9活性上升(p＜0.01)；TCE引起NHEK的△Ψm呈现时间和剂量依赖性下降,△Ψm的下降在培养4h时与对照相比就存在显著性差异.结论 TCE诱导NHEK凋亡中,线粒体介导的内部凋亡途径发挥重要作用.
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