【摘 要】
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通过PCR方法克隆了PCV1 ORF2基因,构建重组质粒pMD-ORF2作为标准阳性模板.同时根据GenBank中的PCV1 ORF2基因序列设计了用于FQ-PCR的一对引物和一条TaqMan探针.通过条件优化,
【机 构】
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广东省农科院兽医研究所,广东,广州,510640
【出 处】
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中国畜牧兽医学会养猪分会2006年学术年会暨第四次全国会员代表大会
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通过PCR方法克隆了PCV1 ORF2基因,构建重组质粒pMD-ORF2作为标准阳性模板.同时根据GenBank中的PCV1 ORF2基因序列设计了用于FQ-PCR的一对引物和一条TaqMan探针.通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-ORF2为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了PCV1检测的荧光定量PCR方法.结果表明，该方法检测灵敏度可达1.0×101拷贝/μL,线性范围为1010～101,达10个数量级;对起始浓度为1.0×107、1.0×106、1.0×105拷贝/μL的标准品的最终实际测得值分别为1.001×107、0.869×106和0.988×105拷贝/μL,变异系数分别为4.758％、1.865％和3.836％,说明此方法具有良好的准确性和重现性.对阳性组织病料的检测表明，该方法的检测灵敏度高出常规PCR,与套式PCR(nPCR)具有相近的灵敏度.
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