【摘 要】
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目的 卵巢癌仍然是迄今致死率最高的妇科恶性肿瘤,紫杉醇是首选的一线化疗药物,但耐药是卵巢癌患者治疗失败和死亡的最主要原因之一.我们前期研究证实了卵巢癌紫杉醇耐药和细胞自身的自噬有关.另一方面一些研究显示超声联合微泡(USMB)能提高耐药肿瘤对化疗药物的敏感性,但机制仍不明确.因此我们提出假设USMB对耐药肿瘤细胞的自噬调节是增加化疗药物敏感性的机制之一.本研究目的在于证实USMB对紫杉醇耐药性卵巢
【机 构】
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310000杭州市,浙江大学医学院附属妇产科医院超声科 浙江大学医学院附属邵逸夫医院超声科
【出 处】
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第三届全国暨国际超声分子影像及生物效应和治疗学术会议
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目的 卵巢癌仍然是迄今致死率最高的妇科恶性肿瘤,紫杉醇是首选的一线化疗药物,但耐药是卵巢癌患者治疗失败和死亡的最主要原因之一.我们前期研究证实了卵巢癌紫杉醇耐药和细胞自身的自噬有关.另一方面一些研究显示超声联合微泡(USMB)能提高耐药肿瘤对化疗药物的敏感性,但机制仍不明确.因此我们提出假设USMB对耐药肿瘤细胞的自噬调节是增加化疗药物敏感性的机制之一.本研究目的在于证实USMB对紫杉醇耐药性卵巢癌细胞的自噬调节作用.方法 使用自主研发的低能聚焦超声仪(频率1.13 MHz、声强0.4 pp、占空比100％、时间2分钟)联合SonoVue超声造影剂对耐药卵巢癌细胞A2780-TR和SKOV3-TR30进行辐照,实验分为超声组(cell+USMB,cell+PTX紫杉醇+USMB)和对照组(cell、cell+PTX).连续性观察72小时内细胞存活率,采用Western blot、qRT-PCR等技术检测Beclin1、Atg5、LC-Ⅱ等自噬相关蛋白的表达,采用电镜观察细胞内自噬小泡超微结构和数目,采用共聚焦荧光显微镜观察转染GFP-LC3质粒后细胞内GFP-LC3-Ⅱ阳性小泡数量的变化.进一步用BafA1抑制自噬溶酶体降解,观察各组细胞存活率和蛋白表达、自噬小泡数量等变化.结果 cell+PTX+USMB组细胞存活率在24h后明显低于其他各组,差异具有显著性(P＜0.05)；cell+PTX+USMB组Beclin1、Atg5、LC-Ⅱ等自噬相关蛋白的表达显著上调,电镜下细胞内自噬小泡增多,共聚焦荧光免疫显微镜下GFP-LC3-Ⅱ阳性小泡数量增加.溶酶体抑制剂BafA1抑制自噬降解后,BafA1 +cell+USMB组与BafA1+cell组、BafA1 +cell +PTX组与BafA1 +cell+PTX+USMB组各时间点细胞存活率无显著性差异,BafA1 +cell+USMB组和BafA1 +cell+PTX+USMB组自噬蛋白表达较cell+USMB组和cell+PTX+USMB组增高,荧光免疫阳性信号增强.结论 低能聚焦超声联合微泡可激活紫杉醇耐药卵巢癌细胞的自噬活性,且自噬激活导致细胞死亡,对紫杉醇的敏感性增加.本研究为USMB在耐药肿瘤化疗的增敏治疗提供了理论依据,USMB是治疗耐药性肿瘤的一种的新的有希望的方法.
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