【摘 要】
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目的:探讨超声靶向微泡破坏技术介导结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的短发夹状RNA干扰(CTGF-shRNA)质粒转染大鼠肾成纤维细胞的可行性及应用价值.方法:设计与合成CTGF的3对shRNA的靶点序列和1对阴性对照序列,对表达质粒进行鉴定和筛选,将500 g CTGF-ShRNA质粒加入0.5 mL Targesphere超声微泡制备
【机 构】
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南京军区南京总医院超声诊断科 南京源端生物科技有限公司
【出 处】
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中华医学会第十五次全国超声医学学术会议
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目的:探讨超声靶向微泡破坏技术介导结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的短发夹状RNA干扰(CTGF-shRNA)质粒转染大鼠肾成纤维细胞的可行性及应用价值.方法:设计与合成CTGF的3对shRNA的靶点序列和1对阴性对照序列,对表达质粒进行鉴定和筛选,将500 g CTGF-ShRNA质粒加入0.5 mL Targesphere超声微泡制备得到CTGF-ShRNA质粒超声微泡复合物,检测质粒与微泡的结合率.体外培养大鼠肾成纤维细胞(NRK-49F细胞),将细胞按8x104/孔浓度铺入24孔板中,应用超声仪(Artisan Corporation)进行分组转染,分为:空白细胞对照组、裸微泡组、单纯CTGF-shRNA质粒组、CTGF-shRNA质粒微泡复合物组,均加以超声辐照,每组质粒用量为3 g,细胞微泡比1:25,超声辐照强度为1.5W/cm2,辐照时间为15s,在转染后48h应用荧光显微镜定性观察CTGF基因的表达情况,并对CTGF-ShRNA质粒干扰效果进行检测.
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