【摘 要】
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感染性cDNA克隆是研究RNA病毒分子机制的非常重要的工具。本研究的主要目的是构建猪基因3型戊型肝炎病毒上海分离株SAAS-JDY5的全长cDNA感染性克隆。方法：采用重叠PCR和限制性酶切位点分析的方法,把相邻两段相互重叠的9个cDNA片段连接成一个全长cDNA克隆,构建成功的全长克隆和目的序列相比有14个碱基的突变。运用定点突变的方法把9个非沉默突变位点变回和目的序列相同的位点,而剩余的5个沉
【机 构】
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上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室 南京农业大学动物医学院
【出 处】
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上海市畜牧兽医学会2015年学术年会
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感染性cDNA克隆是研究RNA病毒分子机制的非常重要的工具。本研究的主要目的是构建猪基因3型戊型肝炎病毒上海分离株SAAS-JDY5的全长cDNA感染性克隆。方法：采用重叠PCR和限制性酶切位点分析的方法,把相邻两段相互重叠的9个cDNA片段连接成一个全长cDNA克隆,构建成功的全长克隆和目的序列相比有14个碱基的突变。运用定点突变的方法把9个非沉默突变位点变回和目的序列相同的位点,而剩余的5个沉默突变位点作为遗传标志保持不变。结果：感染性克隆经线性化后体外转录的RNA感染Huh7细胞,经免疫荧光检测HEV病毒蛋白可以在Huh7细胞中表达,SD大鼠感染后也出现了病毒血症,粪便排毒和血清阳转等。结论：我们的研究结果表明成功构建了猪基因3型戊型肝炎病毒SAAS-JDY5株的全长感染性克隆,大鼠可以作为HEV感染的动物模型。
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