黄瓜CsTCIP基因的克隆及表达特性分析

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翻译控制肿瘤蛋白(TCTP,translational controlled tumor protein)是生物体中一种普遍存在且高度保守的多功能蛋白。本课题组前期研究发现CsTCTP在黄瓜与白粉病互作中可能起着重要作用,但CsTCTP在植物抗病反应中的作用与机制尚不清楚。进行了黄瓜CsTCTP基因(CsTCTP1和CsTCTP2)的分子克隆以及时空表达特性分析,以期更深入认识植物中TCTP的生物学功能及其调控机制。植物材料为黄瓜姐妹系B21-a-2-2-2(感白粉病品系)和B21-a-2-1-2(抗白粉病品系),二者在商品性、株形、抗霜霉病和枯萎病等方面表现一致,由辽宁省农业科学院蔬菜研究所提供。应用生物信息学软件分析和预测黄瓜CsTCTP的结构、亚细胞定位和功能等,然后采用荧光实时定量PCR技术研究CsTCTP基因的时空表达特性,并构建CsTCTP基因的过表达载体。试验结果表明,CsTCTP在黄瓜不同的组织中表达有差异(CsTCTP1:根>茎>幼叶>成熟叶;CsTCTP2:茎>根>幼叶>成熟叶);接种白粉病菌后,CsTCTP基因在黄瓜抗病品系中的表达高峰早于黄瓜感病品系中,推测黄瓜CsTCTP在黄瓜一白粉病菌互作前期积极参与对白粉病的抗性反应;黄瓜CsTCTP基因的表达受到不同逆境(低温、高温、高盐以及干旱)处理的调控,说明CsTCTP与逆境信号密切相关;黄瓜CsTCTP,基因与ABA、H2O2信号通路密切相关,但与MeJA信号关系不大,其是否参与CaCl2和SA信号通路有待进一步研究证实。生物信息学分析显示CsTCTP具有TCTP-1和TCTP-2特征结构域,亚细胞定位于细胞质中,这一结果与其他植物已知TCTP结构一致。本研究成功构建了超表达载体pCAMBIA1304-CsTCTP1和pCAMBIA1304-CsTCTP2,并成功建立了再生体系,为目的基因转化,研究基因功能奠定了基础。
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