miRNA-140对OA软骨细胞的调控作用及机制

来源 :中华医学会第十八届骨科学术会议暨第十一届COA国际学术大会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:weilove721
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  目的:探索miRNA-140在人正常及骨关节炎(OA)软骨细胞中的表达规律,并研究miRNA-140表达上调或下调对人OA软骨细胞的调控作用及机制,以期为后续研究miRNA-140治疗OA提供理论支持。方法:(1)根据Kellgren and Lawrence(KL)OA影像学分级标准,收集人正常(KL 0级)及轻(KL 1-2级)、中(KL 3级)、重度(KL4级)OA新鲜软骨标本,体外分离、培养软骨细胞并进行鉴定。(2)采用荧光定量PCR法检测正常及OA软骨细胞中miRNA-140表达水平,分析其表达变化规律;(3)采用不同浓度(0、25、50、100及200 nM)的miRNA-140 mimic转染软骨细胞,在转染后不同时间点(24、48及72h)通过PCR和Western blotting法检测细胞Collagen Ⅱ及MMP13基因和蛋白表达水平,筛选miRNA-140 mimic转染软骨细胞的最佳浓度及效果检测最佳时间。(4)采用最佳浓度的miRNA-140 mimic或miRNA-140 inhibitor转染正常及OA软骨细胞,在最佳时间检测细胞Collagen Ⅱ、MMP13、ADAMTS-5、Sox9及Runx2基因及蛋白表达水平,比较miRNA-140上调或下调后各组软骨细胞中上述基因及蛋白表达差异。
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