【摘 要】
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基于Ii内体靶向和CLIP区定向锚定MHCⅡ抗原结合域特征,设计、构建新型PCV2靶向性多表位疫苗,并进行免疫活性鉴定.方法：选取7个PCV2中和表位,组成表位串联体,DNAstar Protean优化组合方式及密码子优化,合成ep cDNA,定向插入pEGX4T-1；通过三轮PCR重叠延伸构建ep置换CLIP区的ep+Ii重组体,经xhoI、xbaI位点定向克隆至pCI-neo多克隆位点处,构建
【机 构】
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山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州,256600;山东绿都生物科技有限公司,山东滨州,256600
【出 处】
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2016第六届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会第五届全国会员代表大会暨2016学术年会、中国微生物学会兽医微
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基于Ii内体靶向和CLIP区定向锚定MHCⅡ抗原结合域特征,设计、构建新型PCV2靶向性多表位疫苗,并进行免疫活性鉴定.方法：选取7个PCV2中和表位,组成表位串联体,DNAstar Protean优化组合方式及密码子优化,合成ep cDNA,定向插入pEGX4T-1；通过三轮PCR重叠延伸构建ep置换CLIP区的ep+Ii重组体,经xhoI、xbaI位点定向克隆至pCI-neo多克隆位点处,构建真核表达载体pCI-neo-ep+Ii；转染COS-7细胞,免疫荧光、Western blot鉴定Ii内体靶向功能与ep表达蛋白免疫活性；提取pCI-neo-ep+Ii免疫Balb/c小鼠,ELISA方法测定血清抗体,评价其免疫效力.优化确定PCV2 ep串联体cDNA大小300bp,编码100位氨基酸残基,并成功构建了pEGX-4T-1-ep重组体；三轮PCR置换构建了ep完整替换CLIP区ep+Ii重组体,大小为873bp,无Ii、ep基因缺失和突变.免疫荧光抗体检测显示,Ii内体靶向功能不受置换ep影响；Western blot鉴定表明,ep+Ii重组蛋白获得有效表达,目的蛋白大小约32.1ku,其与PCV2阳性血清具有良好免疫反应性.小鼠免疫试验显示,pCI-neo-ep+Ii免疫ELISA抗体效价可达1∶1600,明显优于非靶向性pCI-neo-ep的1∶1200.本研究构建了具有内体靶向性PCV2多表位疫苗,明显提高表位疫苗免疫抗体效价,为PCV2新型疫苗研究奠定了基础.
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