体外连续培养一种近来在我国鉴定的羊巴贝斯虫

来源 :中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第七次代表大会暨第十二次学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gongzi2009
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2001年用采自新疆牛羊体的血红扇头蜱和小亚璃眼蜱感染除脾绵羊时,分离获得一株巴贝斯虫,通过对其形态特征、致病性、传播媒介和18S rRNA与ITS基因序列比对分析等研究,初步确定其为一种新发现的羊巴贝斯虫,并将其暂命名为羊巴贝斯虫未定种新疆株.为了对该寄生虫进行深入研究,本研究应用感染的羊血,建立了该寄生虫持续体外培养系统.在24和6孔板中,以RPMI 1640培养液,添加20%的胎牛血清和7.5%的绵羊红细胞,在37℃、5%CO2条件下静置,隔天换液,培养4天后红细胞染虫率可达到10%.在75cm2的细胞培养瓶中,绵羊红细胞浓度减少到2.5%,其它条件不变的情况下,红细胞染虫率可达到20:50%.此外,应用该培养系统,以有限稀释的方法,筛选获得两株该寄生虫的单克隆虫株G2和G5.然后应用微量分光光度和染虫率计算的方法,测定其体外生长周期,结果显示其在绵羊红细胞中的生长周期在15.20-16.27小时之间.同时应用该培养系统,在体外测定了该寄生虫是否入侵绵羊、山羊、黄牛、梅花鹿和人的红细胞,结果显示,该寄生虫的两个单克隆虫株在体外能够入侵绵羊、黄牛、梅花鹿、和人的红细胞,但是在人的红细胞中不能传代增殖,而不能入侵山羊的红细胞.体内实验研究显示,该寄生虫不能感染黄牛.最后,应用该培养系统,自甘肃省西部地区采集的19份绵羊血中,分离到一株巴贝斯虫,其ITS基因序列与羊巴贝斯虫未定的相似性达99.5%.
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