【摘 要】
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研究目的:研究H2S/CSE体系在阻塞性黄疸(OJ)致肠黏膜损伤中作用与机制;明确有氧运动改善OJ肠黏膜损伤的效果,并探讨其作用机制。研究方法:50只雄性KM小鼠随机分为5组:假手术组(S),模型组(M),运动组(TM),DL-炔丙基甘氨酸(PAG)+运动组(PT)和硫氢化钠(Na HS)+运动组(NT)。M、TM、PT和NT组小鼠均采用手术线直角悬挂胆总管法构建OJ模型,S组小鼠仅在腹部做一切口
【机 构】
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第十一届全国体育科学大会论文摘要汇编
【出 处】
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第十一届全国体育科学大会论文摘要汇编
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研究目的:研究H2S/CSE体系在阻塞性黄疸(OJ)致肠黏膜损伤中作用与机制;明确有氧运动改善OJ肠黏膜损伤的效果,并探讨其作用机制。研究方法:50只雄性KM小鼠随机分为5组:假手术组(S),模型组(M),运动组(TM),DL-炔丙基甘氨酸(PAG)+运动组(PT)和硫氢化钠(Na HS)+运动组(NT)。M、TM、PT和NT组小鼠均采用手术线直角悬挂胆总管法构建OJ模型,S组小鼠仅在腹部做一切口,缝合,作为空白对照组。在术后7天,TM、NT和PT组第1周进行适应性跑台训练,前三天坡度为零度,每次30min(10m/min),后三天内每天的运动时间递增10min,以后每天运动时间维持在60min(10m/min),坡度为零度,每周6次;PT组腹腔注射H2S合成酶CSE的不可逆抑制剂PAG(40mg/kg),每周6次;NT组腹腔注射H2S的供体Na HS(50μmol/kg),每周6次。干预6周后,摘眼球方式取血,取回肠组织等标本,分别置于-80°C冰箱或10%中性甲醛固定后保存。HE染色观察小鼠肠粘膜形态学变化;生物化学分析法检测血液H2S浓度,谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和总胆红素(TBIL)肝功能,二胺氧化酶(DAO)肠屏障功能生化指标;ELISA法检测D-乳酸(D-LA)肠黏膜通透性指标;q RT-PCR法观察HMGB1、TLR4、NF-κBp65等H2S介导的相关通道分子m RNA,在肠组织中的表达变化;免疫组织化学染色法观察HMGB1、TLR4、NF-κBp65蛋白,在肠组织中的表达变化。研究结果:HE染色显示,S组小鼠肠黏膜正常,腺体、绒毛形态正常,腺上皮排列整齐,基底膜及肌层完整。M组肠黏膜结构破坏严重,绒毛稀疏,部分腺体萎缩,脱落,间质水肿,局部有炎症细胞浸润,肌层萎缩。TM组肠黏膜结构有所改善,腺体排列整齐,细胞形态正常,水肿消失,少有炎症细胞浸润。NT组肠黏膜基本正常,腺体形态正常,绒毛较长,基底部可见增生活跃腺体,接近正常肠上皮。PT组绒毛组织较短,排列紊乱,腺体排列欠规整,基底部炎症细胞浸润。血清检测结果显示,H2S水平:TM组较M组升高(P<0.05);与TM组相比,PT组降低(P<0.01),NT组升高(P<0.01)。DAO水平:TM组较M组降低(P<0.01);与TM组相比,PT组升高(P<0.01),NT组降低(P<0.01)。ALT、AST、TBIL和D-LA水平变化同DAO。qRT-PCR结果显示,TM组小鼠肠组织中HMGB1、TLR4、NF-κBp65 mRNA表达均显著低于M组和PT组(P<0.05),其中NT组表达水平最低。免疫组织化学染色结果显示,HMGB1:S组小鼠肠粘膜上皮细胞内仅见少许淡黄色颗粒,表达不显著;在M组中表达显著增强,肠粘膜上皮细胞胞核、胞浆甚至胞外都可见明显棕黄色乃至棕褐色颗粒沉着,间质中的炎症细胞也呈现相同的染色结果;TM组染色程度较M组和PT明显变浅;NT组染色程度最浅。TLR4:S组小鼠肠粘膜上皮细胞膜表面未见明显黄染;NT组可见少许黄染,位于绒毛顶端;TM组肠上皮细胞膜表面可见明显黄染;PT组肠绒毛顶端细胞膜显著黄染,致部分上皮细胞膜清晰可见。NF-κBp65:S组肠粘膜上皮细胞核内仅见少许淡黄色颗粒;M组细胞核内可见显著黄染,染色阳性区域弥漫分布于整个绒毛;TM胞浆内表达变少;NT组染色程度最浅研究结论:H2S通过降低HMGB1/TLR4及下游炎症因子的表达,减轻OJ肠黏膜屏障损伤;有氧运动通过促进内源性H2S产生,抑制HMGB1/TLR4/NF-κB信号通路,从而发挥对肠粘膜屏障的保护作用。
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