论文部分内容阅读
目的：制备负载Celastrol的PEG-b-PCL纳米粒子(CNPs),研究CNPs在角膜新生血管(CNV)形成中的作用及相关机制.方法：超声乳化法制备负载Celastrol的PEG-b-PCL纳米胶束(CNPs),并测定其表征.检测CNPs对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的增殖、迁移、侵袭及管样结构形成等的作用.Western blot检测CNPs对CoCl2低氧诱导下HUVEC表达VEGF及HIF-1α的影响.Cytokine array检测CNPs对CoCl2诱导巨噬细胞(Mφ)分泌血管形成相关因子的表达；Western blot检测CNPs对MφMMP-9表达.建立两针缝线法诱导SD大鼠CNV模型,评估术后第0、3天,结膜下注射CNPs(5.44 mg/mL,0.1 mL)对CNV的作用.病理组织学检测术后第6天各组角膜组织的变化,检测浸润Mφ的表达,Real time RT-PCR和ELISA分别检测各组角膜组织内VEGF、MCP-1和MMP-9的mRNA和蛋白表达.结果：制备的CNPs的平均粒径为48 nm,载药量为7.36％,包封率为91.46％.体外释放表现两阶段释放模式：即起初Celastrol的快速释放和接下来几周的缓慢释放.CNPs抑制HUVEC管样结构形成、迁移和Transwell侵袭能力,剂量依赖性抑制血管内皮细胞的增殖,下调内皮细胞NFKB P65的表达,减少低氧诱导下HUVEC中VEGF和HIF1α的表达.下调低氧诱导MφVEGF、 MCP-1、 TNF-α和IL-1α的分泌,抑制其MMP-9的表达.术后第6天,对照组CNV平均长度约1.61±0.18mm,平均面积为7.71±0.94mm2.CNPs处理组新生血管的平均长度为0.49±0.12mm,平均面积为2.29±0.61 mm2.HE及免疫组织化学检测显示,CNPs减少角膜组织内炎症细胞浸润,特别是Mφ的浸润.下调角膜组织内VEGF、 MCP-1、 MMP-9的mRNA和蛋白表达.差别具统计学意义.结论：制备的负载Celastrol的PEG-b-PCL纳米胶束,有力地增强了Celastrol的溶解度,此粒径大小比较适合做眼部用药.两根缝线法诱导CNV模型是研究CNV机制和药物研发的理想模型.Celastrol抑制CNV与下调血管内皮细胞及Mφ的功能有关.