【摘 要】
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通过去除白细胞、温浴解离、滤膜过滤和反复清洗等步骤解离和纯化猪附红细胞体抗原,超声裂解后与弗氏佐剂混合免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,以小鼠腹腔巨噬细胞为饲养细胞,使
【机 构】
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延边大学农学院,吉林,延吉 133002
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第十三次学术研讨会
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通过去除白细胞、温浴解离、滤膜过滤和反复清洗等步骤解离和纯化猪附红细胞体抗原,超声裂解后与弗氏佐剂混合免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,以小鼠腹腔巨噬细胞为饲养细胞,使用分子量为1450的PEG(聚乙二醇)为融合剂,对免疫小鼠的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合.通过HAT、HT筛选培养基和猪附红细胞体间接ELISA检测方法筛选能稳定分泌抗猪附红细胞体单克隆抗体的杂交瘤细胞株.单抗的特异性试验,应用Western-blot方法检测单抗是否与猪附红细胞体、弓形虫、猪链球菌、猪肺炎支原体和猪繁殖与呼吸综合症病毒发生反应.应用抗体亚类试剂盒对单抗的抗体亚类进行鉴定.猪附红细胞体阳性血液制作血涂片,染色后应用激光扫描共聚焦技术观察单抗所识别抗原的细胞定位.结果显示：试验成功筛选出2株能稳定分泌抗猪附红细胞体单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为3F7和2C4.经猪附红细胞体间接ELISA检测方法检测诱生小鼠腹水产生的抗体效价可达1：16000和1：14000.Western-blot鉴定结果表明2株单抗均能特异性地与猪附红细胞体结合,3F7株单抗可识别40ku蛋白抗原,2C4株单抗可识别33ku蛋白抗原.2株单抗与弓形虫、猪链球菌、猪肺炎支原体和猪繁殖与呼吸综合症病毒均不发生交叉反应.抗体亚类鉴定结果显示所获得2株单抗均为IgG2a亚型.激光扫描共聚焦显微镜观察结果显示：红细胞呈红色,猪附红细胞体呈绿色荧光,大部分分布在红细胞的边缘.表明,单抗所识别抗原处在猪附红细胞体表面.2株抗猪附红细胞体单抗的成功制备和鉴定,将为猪附红细胞体病的快速检测和防治奠定基础.
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