【摘 要】
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为了对产气荚膜梭菌α毒素进行快速、有效的检测,本研究以单克隆抗体(MonoclonalAntibody,mAb)为基础,建立了双抗体夹心ELISA(DoubleAntibody Sandwich ELISA,DAS-ELISA)方法
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为了对产气荚膜梭菌α毒素进行快速、有效的检测,本研究以单克隆抗体(MonoclonalAntibody,mAb)为基础,建立了双抗体夹心ELISA(DoubleAntibody Sandwich ELISA,DAS-ELISA)方法。纯化原核表达的α毒素蛋白为免疫原,利用杂交瘤技术获得3株稳定分泌α毒素mAb的细胞株制备腹水型mAb,并分离纯化作为检测抗体,免疫新西兰大白兔制各抗α毒素多克隆抗体纯化后作为捕获抗体,通过试验优化反应条件,建立标准曲线;并对建立的DAS-ELISA方法进行性能评价及初步应用。DAS-ELISA方法对α毒素的有效检测范围为5.86~375ng/mL,最低检测线为4.57ng/mL,比多抗-多抗双夹心ELISA有更高的特异性和敏感性。初步应用结果显示,相同培养条件下,本实验保存的A-E型产气荚膜梭菌标准菌株的不同培养上清中,α毒素含量差异较大,A型菌(NCTC528)中α毒素含量显著高于其他菌型。本研究成功制备了高特异性的mAb,并建立了特异、灵敏、稳定的DAS-ELISA方法,为高效检测α毒素提供了有效工具。
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