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奶牛乳房炎是全球奶牛业最常见的疾病之一,可引起严重的经济损失。奶牛乳房炎感染菌多种多样,金黄色葡萄球菌(S.aureus)就是其中最主要的致病菌之一。S.aureus引起的奶牛乳房炎常采用抗生素加以控制和治疗。但由于抗生素的长期广泛使用和滥用,不仅造成了S.aureus耐药菌株频繁出现,而且抗生素在奶产品中的残留也严重威胁着食品安全。因此,研究和使用疫苗来防控S.aureus感染已成为奶业领域的热点。已有研究证明,S.aureus灭活苗、荚膜多糖结合苗等免疫效果不理想;抗原亚单位疫苗虽然有一定免疫保护效果,但存在着细胞免疫应答弱、生产工艺复杂等诸多缺点。因此,本研究拟利用大肠杆菌Lpp’OmpA来表面展示S.aureus的TRAP蛋白,并研究其免疫原性,为探索新型奶牛乳房炎S.aureus疫苗提供数据支持。本研究通过over-lapPCR方法融合了lpp’ompA和lpp’ompA-traP基因,利用表达载体pQE30,分别构建了质粒pLO和pLO-TRAP。利用宿主菌XL1-Blue,转化获得了XL1-Blue/pLO和XL1-Blue/pLO-TRAP菌株。XL1-Blue/pLO-TRAP经IPTG诱导表达,产生了预期大小的蛋白。经全菌体ELISA、流式细胞术检测和激光共聚焦扫描显微镜观察证明,TRAP借助Lpp’OmpA成功地展示在大肠杆菌XL1-Blue表面。将重组大肠杆菌XL1-Blue/pLO、XL1-Blue/pLO-TRAP和TRAP蛋白用弗氏佐剂乳化后,分别免疫接种ICR小鼠,免疫后不同时间采取血清检测TRAP特异性抗体水平和抗体亚类;利用ELISPOT检测IL-4和IFN-γ、间接ELISA方法IL-17A;然后分别用S.aureusNewman和HLJ23-1菌株对免疫小鼠进行攻毒。结果,XL1-Blue/pLO-TRAP和TRAP均能够刺激产生高水平的TRAP特异性抗体;细胞因子检测结果表明,XL1-Blue/pLO-TRAP组能刺激小鼠产生良好的细胞免疫和体液免疫,与TRAP免疫组相似。我们的实验结果表明,大肠杆菌表面展示的Lpp’OmpA-TRAP融合蛋白具有良好的免疫原性。