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目的:TNF-α在调节骨稳态中起重要作用,但TNF-α对成骨细胞成骨分化的调节作用仍有争议。Ephrin B2-Eph B4信号对成骨分化起重要调控作用,但是TNF-α与ephrin B2-Eph B4信号之间的关系尚不明确。本文通过体外实验探讨低浓度TNF-α对前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化及ephrin B2-Eph B4信号表达的影响,从而初步探讨ephrin B2-Eph B4信号在TNF-α介导的成骨细胞成骨分化中的调控作用。方法:应用CCK-8试剂盒检测低浓度TNF-α(0.1、1 ng/ml)对MC3T3-E1细胞增殖(1~3天)的影响。应用聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫印迹实验(western blot)检测低浓度TNF-α刺激24和48小时后MC3T3-E1细胞Runx2、BSP、ephrin B2、Eph B4基因及蛋白表达水平。应用碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒检测低浓度TNF-α刺激7、14天后MC3T3-E1细胞的ALP活性。应用茜素红染色检测低浓度TNF-α作用28天后MC3T3-E1细胞矿化结节形成情况。通过慢病毒感染实现Eph B4的表达干扰,应用ephrin B2-fc激活ephrin B2-Eph B4信号,加入TNF-α(1 ng/ml)刺激48小时,检测MC3T3-E1细胞内Runx2、BSP蛋白表达水平、ALP活性及矿化结节形成情况。?结果:低浓度TNF-α对MC3T3-E1细胞增殖没有影响。与对照组相比,低浓度TNF-α刺激MC3T3-E1细胞24、48小时后Runx2和BSP基因和蛋白表达水平升高,同时,ephrin B2、Eph B4基因及蛋白表达升高;刺激7、14天,ALP活性明显升高;刺激28天,矿化结节形成明显增多。Eph B4干扰后,1 ng/ml TNF-α下调MC3T3-E1细胞中Runx2、BSP蛋白表达,ALP活性降低,矿化结节形成减少。单独加入ephrin B2-fc或TNF-α,MC3T3-E1细胞内Runx2和BSP蛋白表达水平均升高,ALP活性增强,矿化结节形成增加。同时加入ephrin B2-fc和TNF-α后MC3T3-E1细胞Runx2、BSP蛋白表达水平进一步升高,ALP活性和矿化结节形成能力进一步增强。结论:低浓度TNF-α对成骨细胞的促成骨分化作用可能是通过成骨细胞内ephrin B2-Eph B4信号通路调控的。