RG108处理对猪胎儿成纤维细胞甲基化水平及体细胞核移植胚胎发育的影响

来源 :上海市畜牧兽医学会2013年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:my_code
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本文使用RG108处理猪胎儿成纤维细胞(PFF),研究其对细胞甲基化水平和核移植效率的影响.使用0.005,0.05,0.5和5μM RG108四种浓度分别处理细胞24,48和72h后,用高效液相色谱法(HPLC)分析细胞甲基化水平;MTT法及荧光显微镜观察法检测RG108对细胞生长及凋亡的影响;Giemsa染色分析四种浓度处理72h后细胞的染色体变化及对核移植效率的影响.通过两因素方差分析,结果显示RGl08处理浓度与处理时间无交互作用(P>0.05),四种处理浓度间细胞甲基化水平差异不显著(P>0.05),但不同处理时间却能显著的影响甲基化水平(P<0.05)。5μMRG108处理细胞72h后甲基化水平显著低于对照组(3.80%±0.12% vs 5.37±0.14%,P<0.05).RG108对细胞生长有一定的抑制作用,且0.05,0.5和5μM组经处理72h后凋亡比例显著提高(3.54%±0.85%,4.62%±1.16%,6.34%±0.87% vs l.57%±0.49%,P<0.05).RG108处理对细胞的染色体数目没有显著影响.0.5和5μM RGl08处理72h后的PFF作为供体进行核移植,结果与对照组相比,显著提高了其卵裂率(62.07±2.74%,66.67±2.20% vs 55.81±1.27%,P<0.05)和囊胚细胞数(39.8±10.7,39.4±5.1 vs 35.9±7.1,P<0.05),0.5μM组囊胚率显著高于对照组((16.24±0.67%vs12.80±1.49%,P<0.05)).结果表明,RG108处理能降低细胞甲基化水平,且呈时间依赖性.虽然处理后细胞活力有所下降,凋亡比例增加但染色体数目不发生显著变化,PFF经0.5μM浓度处理72h组能显著提高核移植胚胎效率。
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