【摘 要】
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本实验通过RT-PCR 的方法从比格犬的脾脏中提取基因组DNA扩增比格犬α7干扰素成熟肽基因.将纯化的PCR产物克隆至pMD19-T载体,转化入感受态细胞DH5α中,经PCR检测及测序鉴定表
【机 构】
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青岛农业大学动物科技学院,山东青岛 266109
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第二十次学术研讨会暨中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十九次学术研讨会
论文部分内容阅读
本实验通过RT-PCR 的方法从比格犬的脾脏中提取基因组DNA扩增比格犬α7干扰素成熟肽基因.将纯化的PCR产物克隆至pMD19-T载体,转化入感受态细胞DH5α中,经PCR检测及测序鉴定表明,所克隆的目的基因为比格犬α7干扰素成熟肽,与GenBank中登录的犬干扰素序列(NM001006654)的同源性达到100％.在此基础上构建重组原核表达质粒pET-32a-CaIFN-α7,并转化至表达宿主BL21(DE3)中.该工程菌在37℃经IPTG诱导后进行SDS-PAGE 电泳,结果表明在分子质量约38.4kD的位置出现了明显的目的蛋白条带,表达产物主要以包涵体形式存在.经凝胶分析软件Bandscan分析,表达产物约占菌体总蛋白的48.5％.用Protein Refolding Kit对包涵体进行纯化复性,结果显示重组CaIFN-α7在犬肾细胞(MDCK)上具有较高的抗病毒活性.本试验为比格犬α7干扰素的进一步生产和应用奠定了一定基础.
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