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目的:体外培养和鉴定海马神经前体细胞,并观察皮质酮(CORT)对其增殖能力的影响。
方法:采用无血清培养技术,体外培养神经前体细胞,采用干细胞特异性抗原nestin以及细胞增殖特异性抗原BrdU进行免疫荧光检测,运用β-Tubulin-III和GFAP免疫荧光双标检测海马神经干细胞分化潜能,MTT法检测CORT对海马神经前体细胞增殖的影响。
结果:神经球中大部分细胞均能表达nestin蛋白,神经球大部分是由增殖的细胞组成,来自一个神经球的细胞在分化培养基中生长8天后,既可分化产生β-Tubulin-III阳性细胞(即神经元),又可以生成GFAP阳性细胞(即星形胶质细胞)。给予30μmol/L、60μmol/L和120μmol/LCORT处理,海马神经前体细胞增殖率分别为85.62%、65.61%和56.94%,随着CORT浓度的升高,海马神经前体细胞增殖率受到明显抑制(P<0.05或P<0.01),CORT拮抗剂RU38486可以逆转这一现象。
结论:本实验所培养的细胞既具有自我更新能力,也具有多向分化潜能,符合神经前体细胞的基本特性。CORT浓度的升高,可以明显抑制海马神经前体细胞的增殖,使海马神经发生受阻。