【摘 要】
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多表位核酸疫苗能被多种遗传背景的MHC分子识别、结合,从而得到高效的递呈;在细胞免疫方面具有独特的优势;可以有效应对病原微生物的变异和免疫反应中的诸多不利因素,多表位核酸疫苗可能成为疫苗研究的突破口,为了探讨多表位核酸疫苗防治禽传染性支气管炎病(IB)的可能性,本研究以本实验室鸡传染性支气管炎SAIBK株全基因组序列为材料,采用Lasergene软件对IBV结构蛋白进行二级结构分析,抗原表位分析采
【机 构】
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四川大学生命科学学院,四川大学动物疾病防控生物工程研究中心,四川成610064 四川大学生命科学学
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多表位核酸疫苗能被多种遗传背景的MHC分子识别、结合,从而得到高效的递呈;在细胞免疫方面具有独特的优势;可以有效应对病原微生物的变异和免疫反应中的诸多不利因素,多表位核酸疫苗可能成为疫苗研究的突破口,为了探讨多表位核酸疫苗防治禽传染性支气管炎病(IB)的可能性,本研究以本实验室鸡传染性支气管炎SAIBK株全基因组序列为材料,采用Lasergene软件对IBV结构蛋白进行二级结构分析,抗原表位分析采用Kyte-Doolittle法分析氨基酸序列亲水性、Emini法预测特定区域位于蛋白质表面的可能性、Jameson-Wolf法预测各结构蛋白的抗原指数,综合分预测结果,有针对性的选择能获得最佳免疫保护目的表位:采用Sl糖基化B细胞表位保守序列E1和能有效产生保护性抗体滴S2 N端保守B细胞表位E2;以及能诱导CTL效应N核蛋白C端120残基,表位之间连接采用“AAY”氨基酸序列以提高表位被切割的效率,并通过Lasergene软件分析确保各表位之间独立和完整,将设计好多表位基因序列由上海旭冠生物合成,经过酶切定向克隆pVA×1核酸疫苗载体。并将多表位基因克隆至原核表达载体pGEX4T-1,经过IPTG诱导、超声破碎细胞、GST谷胱甘肽凝胶纯化上清成功获得了多表位纯化蛋白,将多表位纯化蛋白包被ELISA板,用IBV阳性多价血清检测其免疫原性,试验结果初步表明多表位纯化蛋白具有免疫原性,能和多价血清发生交叉反应。综合以上结果,我们初步构建了禽传染性支气管炎病毒多表位核酸疫苗,为研制高效、安全的IBV多表位核酸疫苗提供理论依据和基础材料。
其他文献
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目的:根据两组大样本脊柱结核数据的对照研究,探讨50年来我国脊柱结核外科治疗的变化.方法:将方先之等1957年的脊柱结核423例作为历史对照组,解放军总医院2002年1月-2008年1月收治的230例脊柱结核作为一组,对比研究两组病例的年龄构成比、截瘫患者年龄构成比、各个椎体受累的发生率、截瘫患者椎体受累发生率、脊柱外结核的发生情况、外科治疗的方法、单纯脊柱结核治疗结果、合并截瘫患者的治疗结果.结
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