【摘 要】
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目的:本实验旨在构建circACTA2 转基因小鼠,为研究circACTA2 对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的作用及其对血管壁的病理学改变(如高血压、动脉粥样硬化)的影响提供实验动物模型.方法:为了提高circACTA2 体内表达效率,我们先测试了人泛素C(UBC)启动子和鸡β-actin 启动子.将编码circACTA2的DNA 片段定向克隆到真核表达载体pUBC2(+)和pβ-acti
【机 构】
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河北省实验动物重点实验室,河北医科大学实验动物学部 教育部神经与血管生物学重点实验室,河北医科大学
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目的:本实验旨在构建circACTA2 转基因小鼠,为研究circACTA2 对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的作用及其对血管壁的病理学改变(如高血压、动脉粥样硬化)的影响提供实验动物模型.方法:为了提高circACTA2 体内表达效率,我们先测试了人泛素C(UBC)启动子和鸡β-actin 启动子.将编码circACTA2的DNA 片段定向克隆到真核表达载体pUBC2(+)和pβ-actin 2(+)中.转染人动脉平滑肌细胞(HASMCs),经qPCR 鉴定,表明转染pβ-actin 2(+)-circACTA2 与pUBC2(+)-circACTA2 细胞中circACTA2的表达量比对照分别增加了52 和40 倍.将pβ-actin 2(+)-circACTA2 用ScaI 线性化,并由SephadexG-50 进行凝胶层析纯化.纯化产物用0.1×TE 缓冲液稀释至终浓度5ng/μl.水平显微注射法将其导入150 枚C57BL/6×B6D2F1 受精卵原核.将注射后存活的约120 枚受精卵移植入3只当日见栓的假孕KM 雌鼠输卵管中.仔鼠出生10 天后,提取尾尖组织DNA,PCR 扩增鉴定仔鼠基因型.结果:实验证实pUBC(+)-circACTA2 和pβ-actin2(+)-circACTA2 均可驱动circACTA2 在人动脉平滑肌细胞高效表达.PCR 结果显示26只小鼠中有2只为转基因小鼠.结论:成功构建了circACTA2 转基因小鼠模型,可作为转基因小鼠模型在整体水平研究circACTA2对血管系统的影响.
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