【摘 要】
：
目的 观察氢醌(HQ)导致的氧化应激与PKM2蛋白表达的联系,进而了解ROS与PKM2的表达在苯致白血病中的作用,为预防和治疗苯导致的血液中毒提供新的依据.方法 颈椎脱臼8～10d昆明孕鼠取其卵黄囊,运用淋巴分离液及免疫磁珠法分(MACS)选出小鼠卵黄囊胚胎造血干细胞,种板于七种不同浓度氢醌的无血清培养基中染毒6h完成各种实验,流式细胞仪检测ROS的产生,real-time PCR检测Nrf2及其
【机 构】
：
武汉大学医学部公共卫生学院 湖北过敏与免疫相关疾病重点实验室/湖北生物质资源化学与环境生物技术重点实验室,湖北武汉430071
论文部分内容阅读
目的 观察氢醌(HQ)导致的氧化应激与PKM2蛋白表达的联系,进而了解ROS与PKM2的表达在苯致白血病中的作用,为预防和治疗苯导致的血液中毒提供新的依据.方法 颈椎脱臼8～10d昆明孕鼠取其卵黄囊,运用淋巴分离液及免疫磁珠法分(MACS)选出小鼠卵黄囊胚胎造血干细胞,种板于七种不同浓度氢醌的无血清培养基中染毒6h完成各种实验,流式细胞仪检测ROS的产生,real-time PCR检测Nrf2及其靶基因NQO1, GCLM/GCLC和HMOX-1的mRNA表达,Western blotting检测PKM2,Nrf2,Nqo1和hmox-1以及细胞内过氧化物酶、超氧化物歧化酶的蛋白表达.结果 流式细胞仪检测ROS结果显示随着氢醌浓度升高,小鼠卵黄囊造血干细胞内ROS水平逐渐增加.real-time PCR结果显示随着氢醌浓度增加,Nrf2及其靶基因NQO1,GCLM/GCLC和HMOX-1的mRNA表达升高.Western blotting结果显示随着氢醌浓度升高,小鼠卵黄囊造血干细胞中PKM2的表达逐渐降低,Nrf2及其靶基因NQO1和HMOX-1表达逐渐升高.细胞内过氧化物酶、超氧化物歧化酶随着氢醌浓度的升高逐渐降低.结论 HQ可诱导ROS的产生,并抑制PKM2蛋白的表达,而Nrf2靶基因NQO1,GCLM/GCLC和HMOX-1的表达增加.NADPH1氧化酶的表达也相应地增多.细胞内过氧化物酶、超氧化物歧化酶的表达明显受到抑制.
其他文献
目的 探讨硝化应激介导脑血管内皮细胞损伤的分子毒理学关联机制。方法 采用Peroxyni-trite供体(3-morpholinosydnonimine,SIN-1)和糖氧剥夺(OGD)处理血管内皮细胞,构建血管内皮细胞硝化应激损伤模型；免疫印迹法及免疫共沉淀法考察血管内皮细胞硝化应激损伤引起相关蛋白水平变化；免疫荧光法考察相关蛋白的分布变化及相互关联性。结果 硝化应激介导血管内皮细胞TLP蛋白表
目的 探讨植物类雌激素是否具有通过质膜上ERs与胞内细胞信号相互作用发挥非经典的雌激素效应。方法 采用MTS实验检测中草药提取物对雌激素依赖性乳腺癌MCF-7细胞株活性的影响；采用RT-PCR检测提取物对雌激素受体α(ERα)靶基因的影响；通过Western blot检测提取物对ERα、胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白表达的影响和ERα及ERK1/2蛋白分别在浆核中的表达情况；应用免疫荧光检测
目的 体外培养人真皮成纤维细胞,用无机砷及其代谢物进行染毒,观察染毒后细胞增殖、周期及凋亡,并检测DNA修复相关的XPA,XPC,PARP1和ERCC3基因的表达变化,探讨砷及其代谢物导致细胞皮肤损伤的分子机制.方法 取8例6～10岁健康儿童志愿者包皮组织进行原代培养、分离人真皮成纤维细胞.传代培养至第10代后,分别以无机砷化合物亚砷酸钠(Na2AsO2)、二甲基胂酸(DMAv)、单甲基胂酸(MM
目的 探讨雌马酚是否可通过质膜上雌激素受体与胞内细胞信号相互作用发挥非经典的雌激素效应及其具体分子过程仍不清楚。方法 检测细胞增殖：MTT实验；检测磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB/Akt)信号通路激活：Western blot检测总Akt和磷酸化Akt (p-Akt)的表达水平；检测ER的转录活性：荧光素酶报告基因实验；检测ER的功能：qRT-PCR检测pS2 mRNA表达水
目的 明确1-溴丙烷(1-BP)的毒性作用机制,寻找能够反映1-BP毒性的生物标志物.方法 雄性Wistar大鼠整笼放入动式吸入染毒柜内染毒浓度为1-BP 1250,2500和5000 mg·m-3,每天8h,每周染毒5d,休息2d,连续4周.染毒结束后次日,将大鼠麻醉后测定大鼠左右两侧坐骨神经传导速度；分离左右大脑半球、海马、小脑和脑干,称重后放入保存管在液氮中将组织迅速冷冻后转移至-80℃冰箱
目的 观察临床应用剂量下的氯喹(CQ)对肾小管自噬的影响及其肾毒性,为拓展CQ的临床应用奠定基础.方法与结果 ICR小鼠每2d灌胃给予CQ0,5,20和40 mg· kg-1,持续1个月.CQ 40mg·kg-1组中可见肾小管上皮细胞空泡化、水肿、坏死,脱落到管腔,甚至出现裸基膜；肾间质炎症细胞浸润,胶原蛋白增多.随着CQ浓度的升高,肾小管上皮细胞p6蛋白表达和TRPM2蛋白表达变化不大,肾小管上
目的 研究神经细胞上的NADPH氧化酶在炎症引起的神经退行性疾病中的作用.结果 脂多糖LPS引起的小胶质细胞激活,能够促进共处理的中脑原代神经细胞和多巴胺能神经元N27中NADPH氧化酶表达增加(包括其主要的亚基gp91phox,p47phox和p67phox).神经炎症反应能够促进中脑原代神经细胞中活性氧自由基(ROS)的产生,同时这种ROS的升高效果可以被NADPH氧化酶的抑制剂消除.对NAD
目的 研究丙烯酰胺(ACR)对Wistar大鼠原代DRG细胞NF-M转运速度的影响并初探其机制.方法 用ACR对原代培养的Wistar乳大鼠背根神经节细胞(DRG)染毒,用四甲基偶氮唑盐(MTT)确定受试物的染毒剂量.将质粒p-GFP-NFM和DsRED共转染进入DRG中,细胞培养48 h后ACR染毒(0,0.14,0.28 mmol· L-1).ACR染毒培养24 h后,将DRG置于荧光显微镜下
目的 研究乳腺非癌病例和不同分期的乳腺癌病例中FRY抑癌蛋白表达情况及其与临床病理参数之间的关系.方法 间接酶联免疫吸附实验(ELISA)及Western blot实验检测自制抗人FRY多克隆抗体特异性,并对20例乳腺癌病例用自制FRY多克隆抗体与商品化FRY抗体分别进行免疫组化检测,验证抗体的可行性；用自制FRY多克隆抗体对1 1例纤维囊性乳腺病及63例不同分期分级的乳腺癌病的中FRY蛋白表达情
目的 探讨咖啡酸苯乙酯(CAPE)是否可以通过调控核因子E2相关因子2(Nrf2)及抗氧化酶的表达而实现对肺成纤维细胞内氧化应激的改善,从而阻止其异常增殖与胶原分泌.这对于深入探讨肺纤维化的发病机理与防治策略具有重要意义.方法 给予小鼠肺成纤维细胞L929细胞H2O2 10 μmol·L-1及不同浓度的CAPE(1 ～50 μg·ml-1)预处理,24 h后应用RT-PCR与蛋白印迹法分别检测细胞