论文部分内容阅读
传染性支气管炎(IB)是危害家禽业的重要疾病.为了构建一个新的N基因片段的串联蛋白作为包被抗原,使抗原位点能更加充分的暴露和去除了非抗原序列,本研究结合IBV N蛋白抗原表位研究进展及线性B细胞表位软件预测结果,综合考虑选出4个位于N蛋白的抗原性基因片段进行串联(命名NE基因),并在大肠杆菌中表达获得融合蛋白(NE-GST),大小52KDa。以NE-GST融合蛋白为包被抗原,建立ELISA方法检测IBV抗体,结果表明NE-ELISA具有较高的敏感性和特异性。近年来,将多个抗原性片段串联,即多表位抗原,已经应用于抗体检测、疫苗研究等领域。本研究中4个基因片段之间以柔性氨基酸(GPGP或GAGA)连接,可以保证各表位之间独立,且多个抗原表位的联合有利于提高检测方法的敏感性。由于选择的蛋白片段包含多个线性表位,在大肠杆菌中表达其活性不受影响。综上,本研究中基于多个抗原性片段串联的NE-ELISA方法可以用于鸡群IBV特异性血清抗体的检测。