【摘 要】
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B7家族是免疫系统中一类免疫调控分子,它们在各种免疫应答中发挥重要的免疫调节功能.B7-H3是最近发现的B7家族新成员,研究表明它在T细胞免疫应答中发挥着重要的调节功能.猪源B7-H3分子在猪体内有两种同型异构体,分别是2Ig和4Ig-B7-H3.尽管猪B7-H3分子的免疫学功能已有报道,但是该分子发挥免疫学功能的结构基础还没有解析.本研究利用昆虫细胞-杆状病毒的Bac-to-Bac表达系统,将猪
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室 香港大学李嘉诚医学院生理系
【出 处】
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第三届东北三省暨内蒙古自治区免疫学学术会议
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B7家族是免疫系统中一类免疫调控分子,它们在各种免疫应答中发挥重要的免疫调节功能.B7-H3是最近发现的B7家族新成员,研究表明它在T细胞免疫应答中发挥着重要的调节功能.猪源B7-H3分子在猪体内有两种同型异构体,分别是2Ig和4Ig-B7-H3.尽管猪B7-H3分子的免疫学功能已有报道,但是该分子发挥免疫学功能的结构基础还没有解析.本研究利用昆虫细胞-杆状病毒的Bac-to-Bac表达系统,将猪2Ig-B7-H3的第26～238位氨基酸和4Ig-B7-H3的第26～456位氨基酸的编码基因连接于分泌性表达载体pFastBac,在Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒后,在HF昆虫细胞中大量分泌表达猪B7-H3胞外区.表达蛋白经过Ni-NTA亲和层析和离子交换层析纯化后进行晶体和X-射线衍射分析.研究结果表明昆虫细胞表达的2Ig和4Ig-B7-H3胞外区大小分别约为35kD和55kD,可被B7-H3的单克隆抗体及抗His单抗特异性识别.对2Ig-B7-H3胞外区蛋白尝试近1000个晶体筛选条件后,成功得到了该蛋白的单晶,并在上海光源收到了分辨率为3.1埃的衍射数据.这些研究结果为解析猪B7-H3的结构基础提供了可能,为我们今后从结构方面解释B7-H3的免疫学功能奠定了基础.
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