利用宏基因组技术定向筛选抗生素产生菌的方法学建立

来源 :第九届全国青年药学工作者最新科研成果交流会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a1263951733
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目的:为了快速从土壤中定向筛选抗生素产生菌,本研究利用宏基因组技术进行了土壤中抗生素产生菌的快速筛选方法的摸索和研究。 方法:建立了用液氮冷冻法和PVPP柱层析法的提取纯化方法,利用6种不同土质的土壤进行了方法验证,并利用Herbimycin产生菌掺入土壤进行了抗生素产生菌筛选方法学的验证。 结果:经提取和纯化后,每克湿土可得到32.25—61.25μg DNA,片段大小为23.1kb左右,基因组DNA样品被证明完整、可适用于后期的分子操作.每克湿土掺入103个Herbimycin产生菌,经土壤基因组DNA提取和纯化后,利用基于合成基因簇设计的特定引物可以从中扩增出目标条带.同时被掺入土壤菌体可以重新被分离纯化出来。 结论:本研究建立了一种快速的定向抗生素产生菌筛选方法,该方法快速、灵敏,比传统的筛选方法减少了大量繁重的工作量,为微生物新药的开发建立一种全新研究方法。
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目的:探讨健胎液提高着床障碍小鼠子宫内膜容受性的分子机制。方法:分别皮下注射米非司酮或吲哚美辛溶液造成小鼠胚泡着床障碍模型,健胎液组自妊娠d1天给予健胎液灌胃,d8观察各组小鼠着床情况,并用荧光免疫组织化学和免疫印迹方法检测子宫内膜整合素β3、粘蛋白-1的表达。结果:健胎液组着床率较模型组明显提高(P0.05),粘蛋白-1在两种模型小鼠的子宫内膜植入点均见较强表达,而健胎液组和正常组均未见表达。结
目的:研究D101型大孔吸附树脂提取淫羊藿苷的工艺。方法:以淫羊藿苷含量测定为指标,用不同浓度的乙醇进行洗脱,对D101型大孔吸附树脂吸附提取淫羊藿苷的工艺进行筛选。结果:通过D101型大孔吸附树脂吸附后,以40%乙醇为洗脱溶媒,6倍量柱体积洗脱效果较好,洗脱物中淫羊藿苷的含量可达67.0%。结论:此法能较好的分离纯化淫羊藿苷,适合大工业生产。
目的:利用高效液相色谱技术,建立胭脂树种子假种皮中降红木素含量的测定方法。方法:条件为:Agela Venusil xBP-C18色谱柱,柱温30℃,流动相为乙腈:水=15:85(v/v),流速1.0mL/min,紫外检测波长450nm。结果:在降红木素进样量为0.1μg~1μg时有良好线性关系(r=0.9998);加标回收实验(n=5)的平均回收率为99.2%,RSD为0.94%。结论:该方法简
目的:筛选糖尿病并发症相关的重要靶点-醛糖还原酶的抑制剂。方法:利用自建的快速、高效的高通量的醛糖还原酶抑制剂的筛选方法,从2410株菌株中筛选阳性菌株.阳性菌株的发酵产物进行分离纯化获得活性化合物,再通过对活性化合物的紫外、质谱、核磁等理化数据的分析进行结构鉴定。结果:筛选得到一个新化学结构的活性化合物N99-253A.该化合物醋糖还原酶有较强的抑制活性,IC5o=180.1μmol/L.该化合
目的:研究stel7基因在依博素生物合成中的功能,获得依博素新衍生物。方法:克隆表达stel7基因.通过同源重组双交换方法构建stel7基因敲除突变株。结果:stel7基因编码产物是磷酸葡萄糖胞嘧啶转移酶;stel7基因敲除突变株产生的依博素衍生物丧失葡萄糖组分且其分子量下降;同时对IL-1R拮抗活性降低。结论:在依博素生物合成过程中stel7基因对葡萄糖前体核苷酸葡萄糖的形成中起关键作用。
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目的:从真菌次生代谢产物中筛选免疫相关疾病治疗药物重要靶点一次黄嘌呤一-酸盐脱氢酶(Inosine monophosphate dehydrogenase,IMPDH)的抑制剂.方法:利用自建的快速高效的IMPDH抑制剂的高通量筛选方法,从真菌代谢产物中筛选阳性菌株.阳性菌株的发酵产物进行分离纯化获得活性化合物,再通过对活性化合物的紫外、质谱、核磁等理化数据的分析进行结构鉴定.结果:筛选分离得到活
目的:编制新型的药品库位编码,使药房药品的管理更加科学化和信息化,使药品的咨询更加快捷和正确.方法:采用1个字母+4个数字+1个字母+4个数字的组合方式对每个药品进行编码,然后把药品的库位编码输入到电脑模块中,运用到门诊电子处方、住院针剂大处方以及药品盘存等工作流程中.结果:新型药品库位编码的运用在药房里起到两大作用:药品的准确定位和药品基本信息的包含.药师和实习生掌握它可以大大缩短对工作环境的熟
目的:通过对益康清咽丸的急性毒性试验及耐受量试验,为临床安全用药提供科学依据。方法:观察给昆明种小鼠一次或多次经口灌胃(ig)益康清咽丸后,出现的毒性反应及死亡分布情况。结果:动物各剂量组在14天内均无任何毒性反应及死亡,动物体重也无明显变化。结论:益康清咽丸对昆明种小鼠ig的最大耐受量大于20.0g/kg,相当于人临床剂量的66.67倍以上,临床用药比较安全。