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目的:ARHI基因是一个抑癌基因,其编码的蛋白在人类多种组织中如卵巢、乳腺、胰腺中表达,但在乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌中表达下调.研究发现ARHI基因抑制胰腺癌细胞的增殖、促进细胞周期停滞、诱导细胞凋亡及自噬发生和抑制细胞迁移.本研究旨在探讨ARHI基因通过对肿瘤微环境中趋化因子和受体的作用,对胰腺癌生长、侵袭转移、免疫和血管生成的影响.方法:1.建立稳定转染pLNCX2-ARHI-EGFP和pLNCX2-EGFP的细胞株.2.收集稳定转染pLNCX2-ARHI-EGFP和pLNCX2-EGFP的细胞,提取RNA,逆转录为cDNA,通过Real-time PCR Array的方法检测两组细胞中84个趋化因子和受体mRNA表达水平的差异.2.挑选与肿瘤血管生成相关的趋化因子和受体,设计引物,通过Real-time PCR的方法验证稳定转染pLNCX2-ARHI-EGFP和pLNCX2-EGFP的细胞中mRNA表达水平的差异是否与PCR Array结果一致.3.将稳定转染pLNCX2-ARHI-EGFP和pLNCX2-EGFP的细胞株接种于裸鼠腋窝皮下,成瘤后取出肿瘤组织,提取RNA,逆转录为cDNA,通过Real-time PCR的方法验证两组肿瘤中肿瘤血管生成相关的趋化因子和受体mRNA表达水平的差异是否与PCR Array结果一致.结果:1.PCR Array结果:1)pLNCX2-ARHI-EGFP组中有36个基因mRNA表达下调(<-2倍),9个基因mRNA表达上调(>2倍);2)与肿瘤血管生成相关基因:促肿瘤血管生成基因中,CCL2、CXCL1、CXCL2、CXCL8、CXCL12和CXCR4表达显著下调(<-6倍),CXCL3、CCR1和CCR2表达轻度下调(<-2倍);抗肿瘤血管生成基因中, CXCL9、CXCL10、CXCL11和CXCR3表达显著上调(>6倍),以CXCL9最明显,达27.8倍;3)与肿瘤转移和侵袭相关基因:CXCL12和CXCR4表达显著下调(<-6倍),MMP-2表达轻度下调(<-2倍);与对远端器官定位浸润和潜伏相关基因:CXCL12、CXCR4和CCR7表达显著下调(<-6倍),CXCR5表达轻度下调(<-2倍);与肿瘤免疫调节相关基因:CXCL8、CXCR1和CCR7表达显著下调(<-6倍),其中以CXCR1尤为明显,达-41.3倍.2.挑选肿瘤血管生成相关趋化因子和受体CXCL1、CXCL8、CXCR4、CXCR3和CXCR2设计引物;验证结果显示,稳定转染pLNCX2-ARHI-EGFP细胞较稳定pLNCX2-EGFP细胞中CXCL8、CXCL1和CXCR4mRNA表达显著下降,CXCR3 mRNA表达显著上调,与PCR Array结果一致;CXCR2表达显著下降.3.pLNCX2-ARHI-EGFP组裸鼠荷瘤较pLNCX2-EGFP组裸鼠荷瘤中CXCL8、CXCL1、CXCR4和CXCR2mRNA表达显著下降,CXCR3 mRNA表达显著上调,与细胞结果一致.结论:ARHI基因影响胰腺癌细胞趋化因子和受体的表达,提示ARHI基因抑制胰腺癌生长、转移等作用部分通过趋化因子及其受体调节肿瘤微环境的血管生成和免疫而实现的.