细菌脂肪氧合酶在大肠杆菌中的分泌表达

来源 :2012工业生物过程优化与控制研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ivb
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  脂肪氧合酶(Lipoxygenase,ECl.12.11.12,简称LOX)广泛存在于植物组织中,它是一种含非血红素铁的酶,专一性催化含有顺,顺-1,4-戊二烯单元的多不饱和脂肪酸(如,亚油酸、亚麻酸和花生四烯酸等)的氧合作用,生成脂肪酸的氢过氧化物.这些过氧化合物可对面粉及鱼油等食品中的胡萝卜素进行漂白;对蛋白质、油、淀粉、植物纤维或它们的混合物进行交联;用于绿色香料、植物激素等的合成。因此,LOX具有广泛的市场需求。NCBI基因组数据库的比对结果表明,铜绿假单胞菌含有LOX基因。以铜绿假单胞菌基因组为模板,通过PCR技术扩增得到LOX基因,将该基因插入到大肠杆菌表达载体pET22b的NdeⅠ-HindⅢ位点,并转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)得到LOX重组菌。250 mL摇瓶发酵结果表明,20℃及1 mM IPTG诱导50 h,重组菌胞外最高酶活达32000 U/mL.3L罐发酵结果表明,在相同诱导条件下重组菌胞外最高酶活可达到30000 U/mL。以10%甘油为保护剂,经过硫酸钱沉淀、阴离子交换对蛋白进行纯化,得到电泳纯的脂肪氧合酶。
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