二化螟CAT基因的克隆及逆境胁迫对其表达的影响

来源 :中国昆虫学会2016年学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xxxhot006
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  [目的]过氧化氢酶(Catalase,CAT)广泛存在于动植物体内,是一种含铁的氧化酶,也是一种重要的机体保护酶,它将过氧化氢(H2O2)还原成氧分子和水,从而维持细胞和机体的正常生理活动.本文旨在克隆二化螟Chilo suppressalis CAT基因,研究其在不同发育历期、不同组织以及逆境条件胁迫下的表达水平.[方法]通过RACE技术克隆二化螟CAT基因全长cDNA序列,利用荧光定量PCR的方法检测CAT基因在二化螟不同发育历期,3龄幼虫不同组织以及3龄幼虫受温度、化学物质、杀虫剂、寄主植物等外界条件胁迫下的表达水平.[结果]克隆获得二化螟CAT基因的cDNA全长序列,命名为CsCAT,全长为2176 bp,其中开放阅读框1662 bp,编码554个氨基酸,编码蛋白质的理论分子量和等电点分别为62.06 kDa和8.83,氨基酸序列包含CAT蛋白的特征序列“FDRERIPERVVHAKGAGA”和“RLFAYPDTH”.CsCAT基因在二化螟的各发育阶段均有表达,在5龄幼虫中表达量最高,在卵中表达量最低.不同组织的表达量测定发现该基因在脂肪体中的表达量显著高于头、表皮和中肠组织的表达量(P<0.05).此外,我们测定了4种逆境条件胁迫对二化螟CsCAT基因表达的影响,结果表明:相对于25℃的常温,30℃以上的高温处理二化螟3龄幼虫1h后,能够显著诱导CsCAT基因的表达,表达量提高了4倍左右(P<0.05),而低温对该基因表达无明显的诱导作用;化合物H2O2(100 mM),过氧化氢异丙苯(CHP,25 mM),硫酸铜(CuSO4,5 mg/L)和氯化镉(CdCl2,5 mg/L)处理48 h后,显著诱导CsCAT基因的表达,表达量与对照比提高了2-3倍(P<0.05);杀虫剂亚致死剂量(LC25)处理48 h后,与对照比,阿维菌素和氯虫苯甲酰胺显著诱导了CsCAT基因的表达(P<0.05),而甲氧虫酰肼显著降低了CsCAT基因的表达(P<0.05);以饲喂人工饲料的试虫为对照,不同寄主植物饲喂二化螟3龄幼虫48 h后,取食香根草的试虫CsCA T基因表达量显著降低(P<0.05),而取食茭白和水稻的试虫CsCAT基因表达量相对于对照组无显著变化.[结论]CAT不仅在二化螟的生长发育过程中发挥重要作用,而且其表达量变化是二化螟响应外界环境条件胁迫的重要作用机制之一.
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