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[目的]梨小食心虫Grapholitha molesta是一种危害极其严重的果树害虫,中肠消化蛋白酶在昆虫生长发育过程中起着重要作用.本研究测定梨小食心虫幼虫中肠内蛋白消化酶活性的最适pH、蛋白酶抑制剂和激活剂对蛋白消化酶活性的作用,为利用蛋白酶抑制剂防治该害虫提供新思路.[方法]提取梨小食心虫中肠液,利用生化分析技术测定蛋白酶活性.[结果]梨小食心虫幼虫中肠总蛋白酶在Tris-HCl, KH2PO4/NaOH和Glycine/NaOH三种缓冲液中最适pH分别为10.5,11.0,11.0,强碱性胰蛋白酶分别为10.5,11.0,11.0,弱碱性胰蛋白酶分别为8.5,9.0,9.0,胰凝乳蛋白酶分别为8.5,9.0,9.5,发现强碱性胰蛋白酶与总蛋白酶的活性变化相似,可推测其在梨小食心虫中肠内是一种极其重要的消化蛋白酶.5种蛋白酶抑制剂(DTT,PMSF,TLCK,TPCL,STI)中,除TLCK对凝乳蛋白酶激活外,其它蛋白酶抑制剂对4种蛋白酶均表现为抑制,且浓度越大抑制效应越明显.抑制剂DTT对总蛋白酶和弱碱性胰蛋白酶的抑制效果高于其它抑制剂.4种蛋白酶激活剂(MgCl2,CaCl2,EDTA,EGTA)中,MgCl2抑制总蛋白酶和胰凝乳蛋白酶活性,而激活胰蛋白酶活性；CaCl2激活总蛋白酶和弱碱性胰蛋白酶活性,而抑制强碱性胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶,EDTA对4种蛋白酶均表现为抑制,EGTA除对强碱性胰蛋白酶表现为激活外,对另外3种蛋白酶表现抑制.用蛋白酶抑制剂PMSF,TLCK,TPCL,STI饲喂梨小食心虫幼虫,各抑制剂均可抑制4种蛋白酶活性,且在不同饲喂时间抑制水平不同.其中STI(50 μg/mL)对4种蛋白酶的抑制效果高于其它抑制剂,且浓度越大抑制效应越明显.10,20和50 μg/mL STI 3种浓度处理组,在取食4h时,4种蛋白酶活性升高,且上升高度与STI浓度有关；酶活性在20 μg/mL STI处理组48 h,50 μg/mL STI处理组60 h时最低,最后达到稳定,表现出抑制剂STI的高效性和持效性.[结论]本研究结果发现蛋白酶抑制剂对梨小食心虫幼虫中肠蛋白消化酶的活性具有一定的抑制作用,其中大豆胰蛋白酶抑制剂STI在害虫防治中具有极其重要的应用价值.