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目的:原发性肝癌是严重威胁人类健康的十大恶性肿瘤之一,新近调查表明世界各地肝癌的发病率仍在不断增加.苦参碱是提取自中药苦参的活性单体,有研究发现苦参碱具有抗肝细胞癌的作用.我们前期预实验发现苦参碱诱导肝癌细胞凋亡同时细胞内自噬体增加,但具体的机制尚有待进一步研究.本研究探讨苦参碱诱导肝癌细胞自噬及相关分子机制.方法:研究选择人肝癌细胞株HepG2、Bel7402细胞,通过Western blot检测LC3B Ⅰ/Ⅱ比例、自噬底物p62/SQSTM1表达变化、GFP-LC3质粒转染、LysoTracker Red染色和透射电镜来观察细胞内自噬流变化,使用Realtime-PCR和Western blot检测PI3K/AKT/mTOR通路和自噬相关基因Beclin-1表达.通过基因芯片技术筛选新的自噬相关基因.结果:1.不同浓度的苦参碱作用于HepG2和Bel7402后,与对照组相比自噬特异性蛋白LC3BⅡ/Ⅰ比例增加,GFP-LC3阳性细胞数量增加(p<0.05),透射电镜可见自噬泡、自噬体和自噬溶酶体形成,提示苦参碱作用后自噬水平增加;2.苦参碱对肝癌细胞自噬作用的分子机制:苦参碱作用HepG2和Bel7402 48小时后p-AKT(Ser473)和p-mTOR (Ser2448)表达下降,总AKT和mTOR表达没有明显变化(p<0.05);Beclin-1在mRNA水平和蛋白水平表达增加(p<0.05);3.基因芯片筛选:苦参碱作用于肝癌细胞HepG2后溶酶体膜相关蛋白-1(LAMP-1)基因上调7.4倍,Realtime PCR和Western blot进一步证明LAMP-1在苦参碱作用下表达增加,免疫荧光结果显示LAMP-1与肝癌细胞HepG2溶酶体存在共定位,且诱发自噬后定位于自噬溶酶体.结论:苦参碱作用于HepG2和Bel7402后自噬水平增加,其机制可能与PI3K/ AKT/mTOR通路的抑制和自噬相关基因Beclin-1上调有关;LAMP-1参与苦参碱诱导的自噬溶酶体形成,可能为苦参碱诱导的自噬相关蛋白.