【摘 要】
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目的:构建B7-H3高表达的结肠癌细胞株SW480,研究B7-H3对SW480细胞侵袭能力的影响及相关的分子机制.方法:利用分子克隆技术构建B7-H3的真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H3,将重组
【机 构】
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江南大学附属医院江苏无锡214062
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目的:构建B7-H3高表达的结肠癌细胞株SW480,研究B7-H3对SW480细胞侵袭能力的影响及相关的分子机制.方法:利用分子克隆技术构建B7-H3的真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H3,将重组载体转入SW480细胞,并用G418筛选得到稳定转染细胞株SW480B7-H3+;Real-time PCR、激光共聚焦分析B7-H3 mRNA、蛋白的表达;利用siRNA干扰技术阻断SW480B7-H3+细胞株B7-H3的表达,获得敲减细胞株SW480B7-H3+kd(knock down);Western Blot检测各细胞株B7-H3、MMP-2、MMP-9、TIMP-2的蛋白表达;Transwell小室方法分析各细胞株的侵袭能力.结果:成功构建了稳定高表达B7-H3的结肠癌细胞株SW480B7-H3+及其敲减细胞株SW480B7-H3+kd;高表达B7-H3可以上调MMP-2、MMP-9的表达同时抑制TIMP-2的表达,促进细胞的侵袭,而干扰B7-H3的表达后可以阻断这种作用.结论:B7-H3可能通过上调基质金属蛋白酶的表达促进结肠癌细胞SW480的侵袭.
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