【摘 要】
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Myostatin是动物骨骼肌块大小的负调控因子,是决定牛、羊等家畜瘦肉率的重要基因之一.与小鼠、"双肌"肉牛和肌肉发达婴儿的情况不同的是,"双肌臀"大白猪和瘦肉率较低的品种,如我国地方猪种相比,未见引起myostatin基因功能缺失或部分丧失的突变.本研究分别克隆了莱芜猪和双肌臀大白猪myostatin基因的5调控区,对该区段的顺式应答元件和单核苷酸多态性进行了对比分析.结果表明,猪myosta
【机 构】
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山东农业大学动物分子遗传育种实验室,泰安,271018 中国农业大学农业生物技术国家重点实验室,北
【出 处】
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中国畜牧兽医学会第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会
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Myostatin是动物骨骼肌块大小的负调控因子,是决定牛、羊等家畜瘦肉率的重要基因之一.与小鼠、"双肌"肉牛和肌肉发达婴儿的情况不同的是,"双肌臀"大白猪和瘦肉率较低的品种,如我国地方猪种相比,未见引起myostatin基因功能缺失或部分丧失的突变.本研究分别克隆了莱芜猪和双肌臀大白猪myostatin基因的5调控区,对该区段的顺式应答元件和单核苷酸多态性进行了对比分析.结果表明,猪myostatin基因的5调控区存在多个肌肉特异性转录因子的结合位点和其他基因特异性的核因子结合位点.与发表的序列(AF093738,Bd011446和AX139026)相比,我们得到的序列少了386bp,其中包括4个E-box序列,说明猪myostatin基因的5调控区存在序列长度多态性.通过PCR-SSCP分析,在该区段检测到2个SNPs,分别位于919和487(AY527152),各由T→A和G→A的突变所产生的.前者与大白猪的初生重和猪的后期日增重有关.
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利用PCR分别扩增猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF3基因和ORF5基因,按正确的读码框用串联的方式依次克隆入pMD18-T载体.经过酶切鉴定和测序证实无误后,酶切目的基因亚克隆入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV.构建成功的重组穿梭质粒经酶切和测序鉴定,含有完整的目的基因表达盒,穿梭质粒用PmeI线性化后可与腺病毒骨架载体pAdeasy-1在细菌(BJ5183)内进行同源重组,以产生
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目的:用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染体外培养2-5代的近交系五指山猪胎儿成纤维细胞(PEF),研究几个因素对转染阳性率的影响.方法:体外分离培养猪胎儿成纤维细胞,经Fugene-6介导pEGFP-N3质粒转染PEF,G418筛选7～15d,对细胞进行纯化.结果:通过对转染条件的优化,可达到较佳的效果,随机整合有EGFP的细胞能为转基因动物提供良好的核供体.
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