【摘 要】
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目的：本研究探讨EVs 在肺上皮细胞和肺成纤维细胞中的交互串扰作用及miR-21通过EVs 在砷诱导的肺纤维化中成纤维细胞的糖酵解及肌成纤维细胞分化中的作用,为发现砷化物所致肺纤维化的生物学机制及寻找新的早期生物学标志提供科学线索。方法：1)用0,1,2,4,8μM NaAsO2 急性处理HBE 细胞后,分别与MRC-5 细胞和LF细胞进行共培养,观察MRC-5 细胞和LF 细胞；2)用0,1,2
【机 构】
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南京医科大学公共卫生学院卫生毒理学系,现代毒理学教育部重点实验室,南京211166
【出 处】
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中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会
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目的：本研究探讨EVs 在肺上皮细胞和肺成纤维细胞中的交互串扰作用及miR-21通过EVs 在砷诱导的肺纤维化中成纤维细胞的糖酵解及肌成纤维细胞分化中的作用,为发现砷化物所致肺纤维化的生物学机制及寻找新的早期生物学标志提供科学线索。方法：1)用0,1,2,4,8μM NaAsO2 急性处理HBE 细胞后,分别与MRC-5 细胞和LF细胞进行共培养,观察MRC-5 细胞和LF 细胞；2)用0,1,2,4,8μM NaAsO2 急性处理HBE 细胞后,提取细胞培养液中的EVs,检测EVs 相关指标,如：CD9、CD63 等,并用提取出的EVs 处理MRC-5 细胞和LF 细胞,检测各细胞及EVs 中miR-21 水平,观察MRC-5 LF 中相同观察指标的变化及规律； 3)利用0,5,10,20 ppm NaAsO2 的饮用水喂养健康6-8 周雄性C57BL 小鼠,在喂养6 个月时处死小鼠取肺组织和血清,,通过免疫组化和Western Blot,RT-PCR 等检测上述效应指标； 4)利用0 或20 ppm NaAsO2的饮用水喂养健康6-8 周雄性C57BL 小鼠和miR-21 敲基因小鼠,在喂养6 个月时处死小鼠取肺组织和血清,检测上述效应指标；5)收集不同砷暴露水平人群的血清等样本,分别检测血清中羟脯胺酸水平；并分离血清中EVs 检测miR-21 水平；检测不同水平砷暴露人群的肺功能等相关指标变化及其规律,并进行血清羟脯胺酸及EVs miR-21 的相关性分析。结果：砷损害的肺上皮细胞通过EVs 将miR-21 水平转入肺成纤维细胞,抑制PTEN 而引起p-AKT 水平升高,进而引起肺成纤维细胞中HK2 和Eno-1 水平升高,葡萄糖摄取增加,乳酸分泌增加,发生Warburg 效应,导致成纤维细胞中α-SMA 和COL1A2 表达升高,肌成纤维细胞激活,造成肺纤维化发生。结论：肺上皮细胞分泌的EVs 中miR-21 在亚砷酸盐诱导的糖酵解相关性肺纤维化的机制中发挥重要作用。
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