目的:采用HRM技术建立一种快速、简便检测BRAF基因T1799A突变的实验方法,并应用于甲状腺肿瘤的检测,初步探讨其临床应用价值。方法:利用定点突变和TA克隆技术构建BRAF基因T1799A突变片段的质粒载体用于HRM检测体系的模板和基因分型对照,通过优化反应体系建立HRM技术检测BRAF基因T1799A突变的方法,并进行方法学评价,并用其对176例临床甲状腺肿瘤患者组织标本进行检测,并与双向基因测序结果比对,探讨其初步的临床应用价值。结果:HRM检测BRAF基因T1799A突变的方法Tm和Ct的CV均较小,重复性好,可以对1pg到100ng浓度范围的DNA模板进行基因分型,突变杂合比例能力的检测结果显示可以检测出不低于25%的突变。176例甲状腺肿瘤患者组织标本的突变检测结果显示甲状腺恶性肿瘤组检出57.3%的突变率,对照组甲状腺良性病变中均无此突变,与测序所得基因型结果完全相符,两组基因突变率比较具有统计学意义(P<0.001)。结论:建立了一种快速、简便、灵敏、特异的适用临床检测的HRM技术检测BRAF基因T1799A突变的方法,为该突变相关的临床疾病的诊断、治疗等提供可选择的实验室工具。