论文部分内容阅读
背景 尽管间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSC)对缺血性疾病的治疗初显功效,但有研究指出组织发生缺血损伤时,其病变区域的缺血缺氧微环境严重地影响了归巢MSC的存活,制约其应有的生物学效应发挥.虽然研究者们为了解决上述难题尝试不同方法,但是直接提高"种子"—MSC对于缺血缺氧环境的耐受能力,从理论上或许具有干预手段简单直接、易产生疗效的优势.目的通过制备负载PHD2-siRNA的带正电荷微泡,在体外与MSC混合,采用UTMD介导的基因转染方法,促进PHD2-siRNA向MSC内转染,通过沉默该细胞的PHD2基因,提高其下游缺氧诱导因子HIF-1a表达,进而达到提高MSC在缺血缺氧环境中存活率的目的.方法 正电荷微泡的制备及评估其负载能力检测;通过UTMD技术介导PHD2-siRNA转染MSC,采用PCR、Western Blotting检测PHD2、HIF-1α的表达情况.实验组:(1)15% MBs+ PHD-2 siRNA+ US(+),(2)15% MBs+PHD-2 siRNA+US(+);阴性对照组:(3)15% MBs+Negative-control siRNA+siRNA+US(+);(4)15% MBs+Negative-control+ siRNA+US(+);(5)正常对照组.结果 (1)薄膜水化法成功制备可负载siRNA带正电荷微米级级正电荷微泡,其粒径分布均匀,带正电荷,生物安全性好,负载转染siRNA的效能高.(2)PCR、Western Blotting数据检测结果相一致,在15% MBs+ PHD-2siRNA+US(+)组,PHD2抑制效果最为显著,PHD2的mRNA的表达量仅占对照组的42.24%;蛋白的表达低于对照组50%;另外,该组的HIF-1α mRNA相应比对照组升高33%,蛋白表达升高并不明显,差异均具有统计学意(P<0.05).结论 UTMD介导PHD2-siRNA可有效抑制MSC的PHD2基因的表达,并促进其下游缺氧诱导因子HIF-1α的表达.这为增强MSC在缺血缺氧环境下的耐受力,提高其存活率奠定了基础.未来可进一步开展MSC靶向基因修饰后在缺血性疾病动物模型的应用.