论文部分内容阅读
目的探讨氯化镧暴露对原代培养星形胶质细胞内线粒体分裂融合的作用研究。【材料和方法】取出生24小时以内的Wistar大鼠的脑进行星形胶质细胞的原代培养,采用GFAP免疫荧光法进行星形胶质细胞的纯度鉴定;原代星形胶质细胞经DMEM,0.0125 mmol·L-1LaCl3,0.025 mmol·L-1LaCl3,0.1 mmol·L-1LaCl3,0.12 mmol·L-1LaCl3剂分别处理细胞24小时后,LDH法测定细胞存活率;采用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测线粒体膜电位,Western blot法检测原代星形胶质细胞内Drp1、Drp1S616、Mfn1、Mfn2的蛋白表达水平。结果①GFAP免疫荧光法显示星形胶质细胞的纯度达到90%以上,可用于建立体外星形胶质细胞模型。②LDH法确定最终染毒浓度为0、0.025、0.05、0.1 mmol·L-1LaCl3;通过Western blot法检测0小时、4小时、8小时、12小时不同时间点Drp1、Drp1S616、Mfn1、Mfn2的蛋白表达水平,在4小时时Drp1、Drp1S616蛋白表达水平最高,Mfn1、Mfn2蛋白表达水平最低,故选取4小时为染毒时间。③星形胶质细胞内线粒体膜电位随着染毒剂量的增加而降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。④星形胶质细胞内Drp1、Drp1S616的蛋白表达水平随着LaCl3浓度的增加,蛋白表达水平逐渐升高,Mfn1、Mfn2蛋白表达水平逐渐减低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 LaCl3可能通过作用于Drp1丝氨酸616位点,使线粒体过度分裂,膜电位去极化,融合减少,不能进行正常的生命活动,从而导致神经细胞功能受损。