【摘 要】
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根据已经克隆的pGEM T-ORF2基因的序列,设计一对引物,进行质粒PCR,扩增ORF2基因大小为598bp的基因片段,克隆到表达载体pET32a中,经XhoI和BamHI酶切鉴定,得到阳性重组表达载体
【机 构】
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中国农业大学农业部预防兽医学重点实验室(北京)
【出 处】
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中国畜牧兽医学会2004年学术年会暨第五届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会
论文部分内容阅读
根据已经克隆的pGEM T-ORF2基因的序列,设计一对引物,进行质粒PCR,扩增ORF2基因大小为598bp的基因片段,克隆到表达载体pET32a中,经XhoI和BamHI酶切鉴定,得到阳性重组表达载体质粒pET-ORF2,将质粒转化到表达宿主菌BL21(DE3)中,经终浓度为2mM的IPTG诱导,高效表达了ORF2基因编码的结构蛋白.表达量为20﹪.截止目前为止,这是国内首次在大肠杆菌中表达了该蛋白,经Western-Blot检测,表达的该衣壳蛋白能够识别PCV2阳性血清,这对猪圆环病毒感染和流行检测方法的建立奠定了良好的基础.
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